芽孢杆菌芽孢的制备方法
    11.
    发明授权

    公开(公告)号:CN106434520B

    公开(公告)日:2019-11-12

    申请号:CN201610856595.X

    申请日:2016-09-28

    Inventor: 尹焕才 田晶晶

    Abstract: 本案涉及芽孢杆菌芽孢的制备方法,包括:将1份的嗜热脂肪芽孢杆菌接种于10份的富营养培养基,在50‑55℃、150‑250rpm/min下培养12h后;随后加入90份的富营养培养基,继续培养12h,获得营养细胞培养液;向1份的营养细胞培养液中加入1份的无机离子培养基,在55‑60℃、100‑150rpm/min下培养12h;每隔12h加入1份的无机离子培养基,直至加入的无机离子培养基的总份数与富营养培养基的份数比例达到7∶1‑10∶1;得到含芽孢杆菌芽孢的培养液。本案仅需两种培养基即可,操作简单,重复性好;培养时间得到缩短,耗时仅需60‑72h;芽孢产量达到了109每毫升,芽孢率在90%以上。

    用于单层细胞平铺的人工基质

    公开(公告)号:CN106644632B

    公开(公告)日:2019-08-27

    申请号:CN201611019350.8

    申请日:2016-11-17

    Abstract: 本案涉及用于单层细胞平铺的人工基质,至少包括有缓冲基液、牛血清白蛋白、糖源、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮和明胶;其中,所述缓冲基液选自PBS缓冲液、Tris‑HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液和NaCl水溶液中的一种;所述糖源选自蔗糖、海藻糖、甘露糖或其组合。本案通过对现有人工基质缓冲液的配方改进,可以使血液中的细胞或者实验室培养细胞在经过预处理(如染色液或荧光标记处理)后,在加入本案人工基质后,可以更好实现细胞在载玻片或类似的载玻片平面结构的单层平铺,以利于光学显微镜或者荧光显微镜(预期为自动化扫描判读装置)进行观察,提高检查结果的准确性。

    用于检测孢子丝菌病的血清凝集剂的制备方法

    公开(公告)号:CN107478820B

    公开(公告)日:2019-06-14

    申请号:CN201710584396.2

    申请日:2017-07-18

    Inventor: 田晶晶 尹焕才

    Abstract: 本案涉及一种用于检测孢子丝菌病的血清凝集剂的制备方法,包括:取出培养的孢子丝菌酵母相,离心去上清;加入‑20℃预冷的预固化液,混匀,置于4℃中反应0.5‑2小时;在4℃下离心,去上清,加入2‑4%多聚甲醛,混匀后在4℃下固定保存过夜;加入0.1‑0.5% TritonX‑100、0.5‑1% BSA、5‑10%的蛋白保护剂和0.02‑0.05%的ProClin300,混匀;加入染色剂,反应10‑20min后,离心去上清,以PBS缓冲液稀释得血清凝集剂;预固化液中包括有乙二醇和甘油磷酸酯。本案无需仪器、成本低、快速、操作简便、结果直观,尤其适合基层医疗机构的检测应用,具有广泛的应用价值。

    流式细胞仪校准用鸡红细胞的制备方法

    公开(公告)号:CN105928753B

    公开(公告)日:2019-01-15

    申请号:CN201610242531.0

    申请日:2016-04-18

    Abstract: 本案涉及流式细胞仪校准用鸡红细胞的制备方法,包括:将采集到的鸡静脉血加入到等体积的分离剂中混合3‑6min;200‑500rpm离心,去上清,得到鸡红细胞;采用磷酸缓冲液洗涤所获得的鸡红细胞;将鸡红细胞分散于保存液中。本案中的鸡红细胞制备方法仅需两步即可完成,可作为很好的产品开发方案;将逐步改变国内流式细胞仪用试剂对进口试剂的依赖,大大降低流式细胞仪的应用成本;与此同时,该试剂的大量生产可推动临床肿瘤倍体检测的方便进行,提高肿瘤治疗质量;所获得的鸡红细胞产品可在常温下可至少保存3个月,4℃下则可保存至少1年以上,且所有试剂均可在带菌条件下进行,从而避免了无菌操作的复杂步骤,降低细胞制备成本。

    一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法

    公开(公告)号:CN104593315B

    公开(公告)日:2017-12-29

    申请号:CN201510003938.3

    申请日:2015-01-06

    Inventor: 尹焕才 田晶晶

    Abstract: 本发明公开了一种制备嗜热脂肪芽孢杆菌的芽孢的方法,包括步骤:菌种活化、菌体增殖、菌体筛选和芽孢诱导;其中,在菌体筛选时在培养基表面覆盖有1~5张无菌滤纸,在芽孢诱导时在培养基中加入5~10重量份的PEG6000。本发明通过改进培养基的配方及培养条件,可在短时间内大批量制备芽孢,且培养基成分廉价易得,工艺条件简单、生产周期短,整个制备工艺一个批次耗时在90小时内,本案提供了一种简单的培养方法和工业化发酵培养的路线,它诱导生产的芽孢纯度高,含量可达1×109个/mL,芽孢转化率大于98%。

    用于检测孢子丝菌病的试剂盒

    公开(公告)号:CN107478821A

    公开(公告)日:2017-12-15

    申请号:CN201710584439.7

    申请日:2017-07-18

    Inventor: 田晶晶 尹焕才

    Abstract: 本案涉及一种用于检测孢子丝菌病的试剂盒,包括有独立分装的预包被有标志抗原的反应板、酶标标志抗原、显色液和终止液。本案通过对特异性抗原的设计,利用双抗原夹心法Elisa实现血清样本中抗体的检测,有效克服了从菌株中直接提取标志抗原含量不足、纯度不高等缺陷,进而解决了由其引起的检测敏感性不足、耗时较长等问题;本试剂盒操作简单,程序简化,易于重复,易于自动化检测。

    用于单层细胞平铺的人工基质

    公开(公告)号:CN106644632A

    公开(公告)日:2017-05-10

    申请号:CN201611019350.8

    申请日:2016-11-17

    Abstract: 本案涉及用于单层细胞平铺的人工基质,至少包括有缓冲基液、牛血清白蛋白、糖源、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮和明胶;其中,所述缓冲基液选自PBS缓冲液、Tris‑HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液和NaCl水溶液中的一种;所述糖源选自蔗糖、海藻糖、甘露糖或其组合。本案通过对现有人工基质缓冲液的配方改进,可以使血液中的细胞或者实验室培养细胞在经过预处理(如染色液或荧光标记处理)后,在加入本案人工基质后,可以更好实现细胞在载玻片或类似的载玻片平面结构的单层平铺,以利于光学显微镜或者荧光显微镜(预期为自动化扫描判读装置)进行观察,提高检查结果的准确性。

    一种基于SPR技术的端粒酶抑制剂筛选系统

    公开(公告)号:CN106442421A

    公开(公告)日:2017-02-22

    申请号:CN201610856409.2

    申请日:2016-09-28

    CPC classification number: G01N21/553

    Abstract: 本发明提供一种基于SPR技术的端粒酶抑制剂筛选系统,其包括:试剂盒,其具有第一反应液、第二反应液和稀释液,所述第一反应液包含100~120mmol/L的dNTP和dNTP储备液;所述第二反应液包含端粒酶及端粒酶储备液;所述稀释液为pH7.3的10~200mmol/L PB或PBS缓冲液;SPR芯片,其具有玻璃片、覆盖于所述玻璃片上的金属镀膜、连接于所述镀膜的端粒DNA。本发明端粒酶抑制剂筛选系统通过采用市场上成熟的SPR仪器,能够实现简单、快速且稳定可靠的端粒酶抑制剂的筛选工作。

    芽孢杆菌芽孢的制备方法
    19.
    发明公开

    公开(公告)号:CN106434520A

    公开(公告)日:2017-02-22

    申请号:CN201610856595.X

    申请日:2016-09-28

    Inventor: 尹焕才 田晶晶

    Abstract: 本案涉及芽孢杆菌芽孢的制备方法,包括:将1份的嗜热脂肪芽孢杆菌接种于10份的富营养培养基,在50-55℃、150-250rpm/min下培养12h后;随后加入90份的富营养培养基,继续培养12h,获得营养细胞培养液;向1份的营养细胞培养液中加入1份的无机离子培养基,在55-60℃、100-150rpm/min下培养12h;每隔12h加入1份的无机离子培养基,直至加入的无机离子培养基的总份数与富营养培养基的份数比例达到7∶1-10∶1;得到含芽孢杆菌芽孢的培养液。本案仅需两种培养基即可,操作简单,重复性好;培养时间得到缩短,耗时仅需60-72h;芽孢产量达到了109每毫升,芽孢率在90%以上。

    芽孢杆菌芽孢的纯化方法
    20.
    发明公开

    公开(公告)号:CN106434519A

    公开(公告)日:2017-02-22

    申请号:CN201610856410.5

    申请日:2016-09-28

    Inventor: 尹焕才 田晶晶

    Abstract: 本案涉及芽孢杆菌芽孢的纯化方法,包括:无菌水洗涤,浓缩;重盐洗液洗涤;酶溶液孵育;表面活性剂溶液洗涤;酶抑制剂溶液洗涤;无菌水再次洗涤;置于80℃水浴中灭菌;最终得到的芽孢杆菌芽孢以无菌水混悬,保存。本案在保证制备的芽孢数量的同时,极大提高了芽孢纯度;通过本案纯化方法可有效去除菌体营养细胞、培养基残留物质及破裂营养细胞释放的蛋白酶等活性物质,有效避免上述物质对芽胞的诱导转化;更利于芽孢悬液在水溶液中的长期保存;本工艺操作简单,工艺易于放大,衰减小,重复性好,易于工业化生产。

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