公开(公告)号：CN117737069B

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410181708.5

申请日：2024-02-19

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) ,  中国农业科学院深圳农业基因组研究所(岭南现代农业科学与技术广东省实验室深圳分中心)

Inventor： 尹鑫 ,  王鑫杰 ,  常继涛 ,  王芳 ,  姜志刚

IPC: C12N15/113 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/70 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法，属于病毒检测技术领域。为解决现有的BVDV检测方法耗时长、假阳性率高、需要昂贵仪器或专业技术人员、无法实现现场实时检测的技术问题。本发明通过序列比对和筛选，获得了6种BVDV特异crRNA，并且通过进一步筛选发现crRNA混合物1在CRISPR反应中可检测目前流行BVDV亚型的所有毒株；设计了RT‑ERA引物可特异性扩增靶标序列，产物可用于下游CRISPR反应；本发明将RT‑ERA技术与CRISPR‑Cas12a系统相结合，建立了一种快速、灵敏高、特异性强的BVDV结果可视的检测方法，所述检测方法可用于BVDV的快速现场检测。本发明所述的基于CRISPR‑Cas12a的BVDV特异crRNA及其相关试剂盒与检测方法可应用于BVDV检测领域。

公开(公告)号：CN117802275B

公开(公告)日：2024-05-17

申请号：CN202410231350.2

申请日：2024-03-01

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

Inventor： 尹鑫 ,  王芳 ,  常继涛 ,  姜志刚

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种犊牛腹泻主要病原三重荧光定量PCR检测方法及其应用，属于分子生物学检测技术领域。本发明解决了常规PCR在灵敏度、效率和病原含量测定等方面存在不足的问题。所述检测方法以待检测样品的RNA或DNA为模板，选择BCoV的N基因、BRV的NSP5基因、大肠杆菌K99基因为检测靶基因，然后比对靶基因序列，确定拟扩增的基因序列候选区域，然后根据确定的基因序列设计定量PCR扩增引物，并于所设计的扩增引物中间设计探针，进行荧光定量PCR检测，最后对荧光定量PCR扩增曲线及Ct值进行分析，获得检测结果。所述检测方法及引物、探针可应用于所述三种病毒或细菌相关检测试剂盒中，适用于牛轮状病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌K99的检测领域。

公开(公告)号：CN118308312A

公开(公告)日：2024-07-09

申请号：CN202410732718.3

申请日：2024-06-07

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

Inventor： 尹鑫 ,  王芳 ,  齐瑛琳 ,  常继涛 ,  孙超 ,  董明奇 ,  姜志刚

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/40 ,  C12N15/85 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14 ,  C07K14/005 ,  C12Q1/70 ,  A61K39/00

Abstract: 一种表达报告基因的重组阿卡斑病毒及构建方法和应用，属于重组病毒技术领域。本发明为了解决现有技术中报告基因的插入会导致弱病毒的复制，以及报告基因丢失的技术问题，提供一种表达报告基因的重组阿卡斑病毒，所述重组阿卡斑病毒由下述组分组成：携带分子标签的AKAV‑S基因节段、AKAV‑M基因节段、AKAV‑L基因节段和报告基因，所述报告基因为mWasabi或Nluc报告基因中的任意一种。本发明所提供的表达报告基因的重组阿卡斑病毒，具有较好的遗传稳定性，能够稳定传代；通过引入mWasabi或Nluc报告基因，实现了评价病毒复制水平的指标和相对变化，以及可视化的目的，可应用于对阿卡斑病毒感染进行实时动态示踪，将成为阿卡斑病毒致病机理研究的重要手段。

公开(公告)号：CN118308291A

公开(公告)日：2024-07-09

申请号：CN202410741854.9

申请日：2024-06-11

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

Inventor： 尹鑫 ,  孙超 ,  常继涛

IPC: C12N5/071 ,  C12N7/00 ,  C12N7/04 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了牛病毒性腹泻病毒易感单克隆细胞株及制备方法与应用，属于生物医学技术领域。本发明通过筛选获得一种牛病毒性腹泻病毒易感单克隆细胞株，解决了目前MDBK‑野生型细胞株培养的BVDV病毒的复制滴度有限，生产效率低，成本较高的问题。所述牛病毒性腹泻病毒易感单克隆细胞株命名为牛源肾脏传代细胞系MDBK‑C14，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.45823，保藏时间为2024年3月4日。本发明所述的牛病毒性腹泻病毒易感单克隆细胞株能够大幅度提高牛病毒性腹泻病毒的复制滴度，可应用于牛病毒性腹泻病毒疫苗种毒生产，从而降低成本。

公开(公告)号：CN117286111A

公开(公告)日：2023-12-26

申请号：CN202310239489.7

申请日：2023-03-13

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) ,  扬州大学

Inventor： 尹鑫 ,  常继涛 ,  李燕华 ,  王芳 ,  姜志刚

IPC: C12N7/00 ,  C12N15/50 ,  C12N15/64 ,  C12N15/65 ,  C12N15/85 ,  C12N7/01 ,  C12N5/10 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了牛冠状病毒分离株、稳定表达牛冠状病毒N蛋白细胞系及在构建反向遗传操作系统中的应用。本发明从腹泻犊牛的粪便中分离获得牛冠状病毒内蒙古分离株，该毒株能较好适应细胞传代，在此基础上，采用高效酵母系统构建牛冠状病毒内蒙古分离株的感染性cDNA克隆；本发明还构建了稳定表达牛冠状病毒N蛋白的BHK‑21细胞系。本发明应用所构建的感染性cDNA克隆和BHK‑21细胞系建立了牛冠状病毒内蒙古分离株的反向遗传操作系统，采用该反向遗传系统拯救得到表达外源蛋白的重组牛冠状病毒，为病毒活载体疫苗的研究提供技术平台；还可以拯救得到牛冠状病毒报告病毒，为牛冠状病毒体内、体外复制动态研究提供可视化技术平台。