公开(公告)号：CN109628454B

公开(公告)日：2022-05-24

申请号：CN201910090967.6

申请日：2019-01-30

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 任建峰 ,  黄姣 ,  霍锦倩 ,  刘姣 ,  祖尧 ,  李伟明

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了斑马鱼糖原贮积症gys1和gys2基因突变体的构建方法，包括以下步骤：选择斑马鱼gys1基因序列的第四个外显子序列设计gys1基因敲除的靶点，gys2基因序列的第三个外显子序列设计gys2基因敲除的靶点，根据上述靶点序列设计扩增引物，以pUC19‑scaffold plasmid为模板进行PCR扩增，经纯化和体外转录获得gys1和gys2基因敲除靶点gRNA，再将gRNA与Cas9蛋白导入斑马鱼受精卵中，获得稳定遗传的斑马鱼gys1和gys2基因纯合突变体。斑马鱼产卵量大，繁殖周期短，胚体透明，有助于进一步研究人类糖原贮积症的发病进程及详细机制。

公开(公告)号：CN108707628A

公开(公告)日：2018-10-26

申请号：CN201810526041.2

申请日：2018-05-28

Applicant: 上海海洋大学

Inventor： 张庆华 ,  岳倩文 ,  徐行 ,  季策 ,  李伟明

IPC: C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/902 ,  A01K67/0275 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/40 ,  A01K2267/0306 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明公开了涉及一种斑马鱼notch2基因突变体的制备方法；包括如下步骤：确定notch2基因敲除的靶点位置；以pUC19‑gRNA scaffold质粒为模板，使用引物T7‑notch2‑sfd、tracr rev进行PCR扩增；对PCR产物纯化、体外转录获得gRNA；将gRNA与Cas9蛋白显微注射入斑马鱼胚胎一细胞期中，筛选获得稳定遗传的notch2基因突变体。本发明利用CRISPR/Cas9技术，通过选择独特的一段打靶区，使得斑马鱼中的notch2基因被敲除，又不“误伤”其他基因，形成Notch2敲除的斑马鱼，为后续基因功能的深入研究提供了实验材料，对于研究Notch信号通路意义重大。