基于3T-seq全基因组范围分析APA的方法

    公开(公告)号:CN103911449A

    公开(公告)日:2014-07-09

    申请号:CN201410138517.7

    申请日:2014-04-08

    CPC classification number: C12Q1/6869 C12Q2563/143 C12Q2525/173 C12Q2525/131

    Abstract: 本发明涉及一种检测RNA?PAS(Poly?A?Site)的方法,提供了一种基于3T-seq全基因组范围分析APA的方法,包括含有oligo?dT的磁珠制备,即将5'端生物素修饰的oligo?dT引物与带链霉亲和素的磁珠混合结合;用所述磁珠与总RNA混合,筛选含有Poly?A的RNA;逆转录,双链cDNA第二链合成,双链cDNA断裂;移除Poly?A结构;末端修饰后连接测序接头;文库回收。该方法减少了RNA水平操作,在DNA水平移除Poly?A序列,消除Poly结构对测序的影响;选择双链DNA断裂酶处理,在不影响文库质量的基础上在DNA水平断裂;简化实验流程,降低实验难度和造价,使其应用范围更广。

    一种从卵泡液中提取cfDNA的方法

    公开(公告)号:CN110144345B

    公开(公告)日:2022-07-15

    申请号:CN201910390311.6

    申请日:2019-05-10

    Abstract: 本发明公开了一种从卵泡液中提取cfDNA的方法,通过对卵泡液样本两步离心去除多余细胞碎片;利用裂解液对卵泡液进行裂解,加入的蛋白酶K消化多余的蛋白,同时加入的Carrier RNA使DNA更易析出沉降;利用羧基磁珠对DNA的吸附作用;在高盐低pH的条件下,将卵泡液中的cfDNA吸附到磁珠上,经过盐洗涤和醇洗涤后,去除100bp以下的片段,洗脱后再次加入0.5倍体积的羧基磁珠,吸附并去除大于300bp的长片段,获得合适长度范围的cfDNA。同时对所获的cfDNA进行末端修复,产生平末端连接,并在3’末端添加碱基A,并在cfDNA两端添加接头并扩增纯化等,完成高通量文库的构建,最终完成上机测序。

    一种用于肺癌预后诊断标志物的应用及检测试剂盒

    公开(公告)号:CN113151462A

    公开(公告)日:2021-07-23

    申请号:CN202110254925.9

    申请日:2021-03-09

    Abstract: 本发明提供了一种用于诊断肺癌预后的生物标志物,其包括hsa‑miR‑21‑5p,hsa‑miR‑141‑5p和hsa‑miR‑490‑3p。本发明通过对肺癌相关miRNA筛选、靶基因的预测和功能分析,进行了预后模型的构建和风险因子评估,通过肺癌组织及癌旁组织检测验证,筛选出的三种新的miRNA标志物,并完成了肺癌预后模型的构建和临床样品验证,hsa‑miR‑21‑5p,hsa‑miR‑141‑5p,hsa‑miR‑490‑3p作为肺癌预后诊断标志物的应用及其检测试剂盒,可用于准确预后、个性化治疗以及疾病监测等。

    胃癌预后诊断标志物TREM1的应用及检测试剂盒

    公开(公告)号:CN110656178A

    公开(公告)日:2020-01-07

    申请号:CN201911029436.2

    申请日:2019-10-28

    Abstract: 本发明公开了一种胃癌预后诊断标志物TREM1在胃癌预后检测及评估中的应用,涉及生物医学领域,所述应用是通过检测所述标志物TREM1的相对表达水平来评估胃癌患者预后情况。本发明还公开了包括所述标志物TREM1的引物与内参的检测试剂盒。本发明提供的胃癌预后诊断标志物TERM1具有高特异性和敏感性,可通过快速、简便的方法检测其相对表达量、进而对胃癌患者的预后进行准确的判断和评估,从分子水平实现对胃癌危险等级的分级分层,迅速、准确地预测胃癌预后,对不同预后程度的患者进行分类治疗,从而指导胃癌病人的个体化精准治疗,节约医疗成本,具有极高的临床应用价值。

    一种从卵泡液中提取cfDNA的方法

    公开(公告)号:CN110144345A

    公开(公告)日:2019-08-20

    申请号:CN201910390311.6

    申请日:2019-05-10

    Abstract: 本发明公开了一种从卵泡液中提取cfDNA的方法,通过对卵泡液样本两步离心去除多余细胞碎片;利用裂解液对卵泡液进行裂解,加入的蛋白酶K消化多余的蛋白,同时加入的Carrier RNA使DNA更易析出沉降;利用羧基磁珠对DNA的吸附作用;在高盐低pH的条件下,将卵泡液中的cfDNA吸附到磁珠上,经过盐洗涤和醇洗涤后,去除100bp以下的片段,洗脱后再次加入0.5倍体积的羧基磁珠,吸附并去除大于300bp的长片段,获得合适长度范围的cfDNA。同时对所获的cfDNA进行末端修复,产生平末端连接,并在3’末端添加碱基A,并在cfDNA两端添加接头并扩增纯化等,完成高通量文库的构建,最终完成上机测序。

    一种用于DNA甲基化检测的试剂盒与方法及应用

    公开(公告)号:CN108796039A

    公开(公告)日:2018-11-13

    申请号:CN201810697732.9

    申请日:2018-06-29

    CPC classification number: C12Q1/6806 C12Q2563/131

    Abstract: 本发明公开了一种用于DNA甲基化检测的试剂盒,其至少包括生物素标记的甲基化的λ‑DNA和链霉素包被的磁珠。还公开了该试剂盒在少量DNA样品甲基化检测中的应用,样品量可低至1ng。本发明还公开了一种DNA甲基化检测的方法及其应用。本发明提供的技术方案显著降低了DNA甲基化检测所需的最低起始样品量,且不需要特定的试剂盒和实验设备,节省成本,具有较高的普适性。在富集甲基化DNA的同时不引入外源DNA污染,若采取文库构建和高通量测序的检测方法时不会受到外源DNA信息的影响,有利于进一步降低测序成本,提高数据质量。

    红藻龙须菜多糖及其制备、抗肿瘤活性检测方法和应用

    公开(公告)号:CN105542024A

    公开(公告)日:2016-05-04

    申请号:CN201610006118.4

    申请日:2016-01-06

    Abstract: 本发明公开了一种来自红藻类植物龙须菜的海洋中药龙须菜多糖,还首次揭示了其作为抗肿瘤药物,尤其是顺铂的增效剂的增效作用,可作为抗肿瘤药物的增效剂。还公开了该龙须菜多糖在制备治疗肿瘤的药物、保健品或食品中的应用,其主要通过抑制肿瘤细胞的生长和增殖达到抗肿瘤作用。对胃腺癌、肺癌和子宫颈癌都有抗肿瘤作用。本发明还公开了龙须菜多糖的制备方法,及其抗肿瘤作用的检测方法。本发明为龙须菜作为海洋药物资源的进一步利用提供了新的途径,本发明的龙须菜多糖在制备抗肿瘤药物、防癌保健品或食品中的用途,也为治疗或预防肿瘤的药物开发提供了新的选择。

    一种精准分析单细胞APA位点的sc3T-seq方法

    公开(公告)号:CN116083531A

    公开(公告)日:2023-05-09

    申请号:CN202310082830.2

    申请日:2023-01-18

    Abstract: 本发明公开了一种精准分析单细胞APA位点的sc3T‑seq方法,涉及分子生物学和生物信息学领域,oligo(dT)20引物与链霉亲和素的磁珠孵育结合,加入少量起始样本和外源单链DNA,双链cDNA合成,双链cDNA断裂,移除polyA,释放带标签的cDNA,加入具有生物素标记的λ‑DNA,加入羧基磁珠,筛选去除外源cDNA,末端修复、加接头、构建cDNA文库,链霉素亲和磁珠去除生物素标记λDNA,得到纯净的样本文库。本发明降低了起始样品量,使分析APA位点的实验技术能够适用于少量样本甚至单个细胞,对于精准检测、分析细胞特异性的APA有很大的作用。

    一种可传代细胞的高保真甲基化位点的分离与分析方法

    公开(公告)号:CN115651973A

    公开(公告)日:2023-01-31

    申请号:CN202211093343.8

    申请日:2022-09-08

    Abstract: 本申请提供一种可传代细胞的高保真甲基化位点的分离与分析方法,包括步骤:(A)将可传代细胞进行传代培养多代后,取不同代数的细胞进行基因组DNA提取,作为实验样本;(B)将spike‑in加入实验样本中,进行重亚硫酸盐转化,构建简并代表性重亚硫酸盐测序文库,并进行测序;所述spike‑in为甲基化和未甲基化的lambda DNA;(C)对于测序数据,根据spike‑in计算转化效率和错误转化率最终对甲基化水平的评估产生偏差,并且对每个位点的DNA甲基化水平采用二项分布近似贝叶斯模型进行定量检测,通过比较不同代别的甲基化水平得到高保真甲基化位点。

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