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公开(公告)号：CN101942024A
公开(公告)日：2011-01-12
申请号：CN201010259905.2
申请日：2010-08-20
Applicant: 清华大学 , 北京思清源生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种肝素酶II融合蛋白及其编码基因与表达方法。本发明提供的融合蛋白(命名为MBP-HepB)，是如下a)或b)的蛋白：a)序列表中序列2的第1-1118所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)在序列表中序列2的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且具有肝素酶活性的由a)衍生的蛋白质。上述蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围之内。将上述基因导入重组大肠杆菌中表达的蛋白肝素酶酶活可达118.4IU/L发酵液，表达量可达179mg/L发酵液，比酶活可达0.66IU/mg。本发明还可通过亲和分离实现了该融合蛋白的一步纯化。
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公开(公告)号：CN101294167B
公开(公告)日：2010-12-22
申请号：CN200810115394.X
申请日：2008-06-23
Applicant: 清华大学
Abstract: 本发明公开了一种生产氢气的方法。本发明所提供的生产氢气的方法，是通过在含有磷酸根离子的培养基中培养产氢微生物生产氢气。在细胞环境中加入磷酸盐，可同时促进ATP快速生成和快速恢复，从而控制细胞内部的ATP水平以及细胞内部的氧化还原电势，加速碳源的消耗和氢气的生成效率，并且，磷酸盐可以在培养体系中重复循环利用，并不会造成对环境的污染。应用本发明的方法，产氢速率可以提高3倍以上，糖利用率可以提高5倍以上，大大提高了氢气的转化效率。
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公开(公告)号：CN101638631A
公开(公告)日：2010-02-03
申请号：CN200910092357.6
申请日：2009-09-07
Applicant: 清华大学
Abstract: 本发明公开了一种甲烷氧化混合菌的保存方法。本发明的方法中，包括将甲烷氧化混合菌菌体置于-70℃～-80℃冻存的步骤。本发明提供的保存甲烷氧化混合菌的方法没有引入其他碳源，可以稳定地保持混合菌群的结构和功能，并且操作方便，需要使用时，将冻存的菌体倒入培养基中培养即可。本发明将在甲烷氧化混合菌的保存及其工业化应用中发挥重要作用。
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公开(公告)号：CN101624591A
公开(公告)日：2010-01-13
申请号：CN200810116220.5
申请日：2008-07-07
Applicant: 清华大学
Abstract: 本发明公开了一种等离子体诱变微生物的方法，是用以中性活性粒子为作用粒子的等离子体射流辐照待诱变微生物，得到突变的微生物。本发明方法中，起主要诱变作用的是等离子体射流中的中性活性粒子，具有以下优点：得到的正向突变菌株活性更高，生产目标产物的能力更强，遗传稳定性高；诱变周期短、诱变效率高；可诱变微生物种类丰富，如原核微生物、真核微生物、古细菌等，既可以是微生物菌落，也可以是菌悬液或者孢子悬浮液；处理后的微生物不需要避光培养，进一步简化了实验操作；整个操作简单、安全、无污染，设备和实验成本低等特点，将在工业微生物诱变育种领域中发挥更大的作用。
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公开(公告)号：CN101608180A
公开(公告)日：2009-12-23
申请号：CN200910090169.X
申请日：2009-07-29
Applicant: 清华大学
Abstract: 本发明公开了一种融合肝素酶。该融合肝素酶是如下a)或b)的蛋白：a)序列表中序列1的第8－1016所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)在序列表中序列1的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且具有肝素酶活性的由a)衍生的蛋白质。上述蛋白的编码基因也属于本发明的保护范围之内。本发明产生的三重融合蛋白的酶活通过摇瓶培养可达660.3IU/L培养基，比酶活可达1.931IU/mg蛋白。本发明可以利用GFP蛋白实现菌体浓度和酶活的快速在线检测。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101608170A
公开(公告)日：2009-12-23
申请号：CN200810115231.1
申请日：2008-06-19
Applicant: 清华大学
Abstract: 本发明公开了产氢工程菌及其应用。本发明提供的产氢工程菌，是如下a)或b)的工程菌：a)灭活E.aerogenes IAM1183中的ΔhybO蛋白得到的工程菌；b)灭活E.aerogenes IAM1183中的ΔhybO蛋白和ΔhycA蛋白得到的工程菌；所述ΔhybO蛋白的氨基酸序列是序列表中的序列1；所述ΔhycA蛋白的氨基酸序列是序列表中的序列4。本发明得到的工程菌可应用于生物制氢，对生物制氢具有巨大的指导意义。本发明获得的工程菌具有以下优点：对环境适应性强、利用底物范围广、利用底物能力强、产氢效率高。
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公开(公告)号：CN101597624A
公开(公告)日：2009-12-09
申请号：CN200910088486.8
申请日：2009-07-02
Applicant: 清华大学
Abstract: 本发明公开了一种细菌发酵生产氢气的方法。本发明的生产氢气的方法是在如下(1)或(2)的条件下，在添加磷酸根离子的基础培养基中培养产氢微生物生产氢气：(1)完全厌氧培养；(2)先在氧气体积百分比浓度为0.1－7.6％培养，然后在完全厌氧条件下培养。所述磷酸根离子为H2PO4－、HPO42－、PO43－、焦磷酸根或聚磷酸根离子。所述磷酸根离子的浓度为0.01－0.15mol/L所述基础培养基。所述产氢微生物为产气肠杆菌。所述产气肠杆菌为产气肠杆菌或过表达聚磷酸激酶的产气肠杆菌。本发明的生产氢气的方法可提高氢气的转化得率，降低生产成本。
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公开(公告)号：CN101397543A
公开(公告)日：2009-04-01
申请号：CN200710175425.6
申请日：2007-09-29
Applicant: 清华大学
Abstract: 本发明公开了一株发孢甲基弯菌及其应用。本发明所提供的发孢甲基弯菌为发孢甲基弯菌(Methylosinus trichosporium)LEB－5，其保藏编号为CGMCC No.2173。本发明还提供了一种生产甲烷单加氧酶的方法即发酵发孢甲基弯菌(Methylosinus trichosporium)LEB－5 CGMCC No.2173得到甲烷单加氧酶。本发明的发孢甲基弯菌(Methylosinus trichosporium)LEB－5 CGMCC No.2173生长速度快、遗传稳定性高，而且易于培养、培养效率高，能以甲烷为唯一碳源和能源产生具有高酶活的甲烷单加氧酶。本发明用发孢甲基弯菌(Methylosinus trichosporium)LEB－5 CGMCC No.2173生产甲烷单加氧酶的方法，克服了目前甲烷氧化菌利用甲烷效率低、生长速度慢、含有的甲烷单加氧酶的催化活性不高等问题，在天然气利用、大宗化学品生产、生物材料开发、瓦斯气体治理、环境污染物的生物修复等方面将会有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN101294167A
公开(公告)日：2008-10-29
申请号：CN200810115394.X
申请日：2008-06-23
Applicant: 清华大学
Abstract: 本发明公开了一种生产氢气的方法。本发明所提供的生产氢气的方法，是通过在含有磷酸根离子的培养基中培养产氢微生物生产氢气。在细胞环境中加入磷酸盐，可同时促进ATP快速生成和快速恢复，从而控制细胞内部的ATP水平以及细胞内部的氧化还原电势，加速碳源的消耗和氢气的生成效率，并且，磷酸盐可以在培养体系中重复循环利用，并不会造成对环境的污染。应用本发明的方法，产氢速率可以提高3倍以上，糖利用率可以提高5倍以上，大大提高了氢气的转化效率。
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公开(公告)号：CN100392072C
公开(公告)日：2008-06-04
申请号：CN200510137456.3
申请日：2005-12-30
Applicant: 清华大学
IPC: C12N1/26
Abstract: 本发明公开了一种甲烷氧化菌的培养方法。该方法是在常规培养甲烷氧化菌的培养基中添加经甲烷饱和的油酸；其中，当对甲烷氧化菌进行液体培养时，将经甲烷饱和的油酸直接加入培养基中，经甲烷饱和的油酸在培养基中的质量百分含量为0.1-20%；当对甲烷氧化菌进行固体培养时，将经甲烷饱和的油酸涂布在固体培养基表面，涂层的厚度为0.5-3mm。与常规培养方法相比，本发明的方法可以成倍地提高甲烷氧化菌的生长速度，最高达50倍。在用该方法对甲烷氧化菌进行固体平板培养时，不再需要频繁地给固体平板补充甲烷气体，菌体的生长速度也得到显著提高。本发明将在甲烷氧化菌及其相关产品的工业化生产中发挥巨大作用，应用前景广阔。
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