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公开(公告)号：CN107619837A
公开(公告)日：2018-01-23
申请号：CN201710855259.8
申请日：2017-09-20
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种利用Cas9切割核酸酶介导Ipr1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法，本发明通过电穿孔的方法将供体载体和针对打靶位点的CRISPR/Cas9表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，供体载体中MSR1启动子可以使Ipr1实现在专职吞噬性细胞中的特异性表达，嘌呤霉素药物筛选后，经过PCR鉴定获得打靶的阳性克隆细胞。以该转基因阳性克隆细胞为核供体，获得转基因克隆胚胎，进一步将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫内，最终获得成活的Ipr1定点插入转基因克隆牛。
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公开(公告)号：CN108949824A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810813577.2
申请日：2018-07-23
Applicant: 西北农林科技大学
CPC classification number: C12N15/85 , C07K14/35 , C12N15/65 , C12N15/907 , C12N2510/00 , C12Q1/66
Abstract: 本发明公开了一种利用Cas9切割核酸酶基于HMEJ的方法介导Ipr1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法，本发明通过电穿孔的方法分别将HMEJ策略的供体载体与HR策略的供体载体和针对打靶位点的CRISPR/Cas9表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，供体载体中MSR1启动子可以使Ipr1实现在专职吞噬性细胞中的特异性表达，嘌呤霉素药物筛选后，经过PCR鉴定获得打靶的阳性克隆细胞。HMEJ策略获得阳性克隆细胞的效率高于传统的HR策略。以HMEJ策略获得的转基因阳性克隆细胞为核供体，获得转基因克隆胚胎，进一步将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫内，最终获得成活的Ipr1定点插入转基因克隆牛。
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公开(公告)号：CN106591364B
公开(公告)日：2018-12-25
申请号：CN201611001075.7
申请日：2016-11-14
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种利用单一Cas9切口酶介导NRAMP1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法，本发明通过电穿孔的方法将供体载体和针对打靶位点的单一CRISPR/Cas9切口酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，供体载体中NRAMP1基因自身启动子可以使NRAMP1实现在专职吞噬性细胞中的特异性表达，嘌呤霉素药物筛选后，经过PCR和Southern Blotting鉴定获得打靶的阳性克隆细胞。以该转基因阳性克隆细胞为核供体，可获得转基因克隆胚胎，进一步将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫内，最终可以获得成活的NRAMP1定点插入转基因克隆牛。
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公开(公告)号：CN106591364A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201611001075.7
申请日：2016-11-14
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/85 , A01K67/0276 , A01K2227/101 , A01K2267/02 , C07K14/47 , C12N5/0656 , C12N2800/107 , C12N2800/80
Abstract: 本发明公开了一种利用单一Cas9切口酶介导NRAMP1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法，本发明通过电穿孔的方法将供体载体和针对打靶位点的单一CRISPR/Cas9切口酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，供体载体中NRAMP1基因自身启动子可以使NRAMP1实现在专职吞噬性细胞中的特异性表达，嘌呤霉素药物筛选后，经过PCR和Southern Blotting鉴定获得打靶的阳性克隆细胞。以该转基因阳性克隆细胞为核供体，可获得转基因克隆胚胎，进一步将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫内，最终可以获得成活的NRAMP1定点插入转基因克隆牛。
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