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公开(公告)号：CN111518783B
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202010277476.5
申请日：2020-04-10
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种新型重组(R)‑ω‑转氨酶、突变体及其在制备西他列汀中的应用，该新型重组(R)‑ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第214位和第146位经单点或二点突变得到。本发明先通过基因重组技术获得高酶活的新型重组(R)‑ω‑转氨酶，再进一步通过定点突变获得新型重组(R)‑ω‑转氨酶突变体，该突变体不仅具有高酶活(785.2U/g)、高立体选择特性(e.e.值99.9％)，而且能够高效催化前体酮底物制备西他列汀，转化率最高可达97.1％。
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公开(公告)号：CN111534494A
公开(公告)日：2020-08-14
申请号：CN202010273326.7
申请日：2020-04-09
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种(R)-ω-转氨酶突变体及其在制备西他列汀中间体中的应用，该突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第77位的精氨酸、第181位的亮氨酸、第130位的精氨酸、第139位的酪氨酸和第273位苏氨酸经多点突变得到。本发明通过基因挖掘技术筛选新型的(R)-ω-TA重组酶，并通过蛋白质工程技术进行分子改造，获得了高酶活、高底物耐受性和高立体选择性的(R)-ω-TA突变体催化剂，该突变体能够以前体酮类似物1-(吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-丁二酮为底物不对称催化合成西他列汀中间体(R)-3-氨基-1-(吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁-1-酮，且转化率较高，最高可达到94.6％。
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公开(公告)号：CN111411095A
公开(公告)日：2020-07-14
申请号：CN202010277479.9
申请日：2020-04-10
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种新型重组(R)-ω-转氨酶及其突变体和应用，该新型重组(R)-ω-转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第72位和第248位经单点或二点突变得到。本发明先通过基因重组技术获得高酶活的新型重组(R)-ω-转氨酶，再进一步通过定点突变获得新型重组(R)-ω-转氨酶突变体，该突变体不仅具有高酶活(1245.2U/g)、高立体选择特性(e.e.值99.9％)，而且能够高效催化前体酮类似物制备西他列汀中间体，转化率最高可达97.4％。
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公开(公告)号：CN111534494B
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202010273326.7
申请日：2020-04-09
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种(R)‑ω‑转氨酶突变体及其在制备西他列汀中间体中的应用，该突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第77位的精氨酸、第181位的亮氨酸、第130位的精氨酸、第139位的酪氨酸和第273位苏氨酸经多点突变得到。本发明通过基因挖掘技术筛选新型的(R)‑ω‑TA重组酶，并通过蛋白质工程技术进行分子改造，获得了高酶活、高底物耐受性和高立体选择性的(R)‑ω‑TA突变体催化剂，该突变体能够以前体酮类似物1‑(吡咯烷‑1‑基)‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑1,3‑丁二酮为底物不对称催化合成西他列汀中间体(R)‑3‑氨基‑1‑(吡咯烷‑1‑基)‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)丁‑1‑酮，且转化率较高，最高可达到94.6％。
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公开(公告)号：CN111411094B
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202010273576.0
申请日：2020-04-09
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种(R)‑ω‑转氨酶突变体及其应用，该突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸、第79位精氨酸、第51位的谷氨酰胺、第149位的缬氨酸、第235位亮氨酸和第216位甘氨酸，经多点突变得到。本发明通过基因挖掘技术筛选新型的(R)‑ω‑TA酶，并通过蛋白质工程技术进行分子改造，获得了高酶活、高底物耐受性和高立体选择性的(R)‑ω‑TA突变体催化剂，该突变体能够生物催化前体酮类似物1‑(3‑氧吡咯烷‑1‑基)‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)‑1,3‑丁二酮合成西他列汀中间体(R)‑1‑[3‑氨基‑4‑(2,4,5‑三氟苯基)丁酰基]吡咯‑3‑酮，且转化率较高，最高可达到95.4％，对于突破西他列汀生物催化制备技术具有里程碑意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111518783A
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN202010277476.5
申请日：2020-04-10
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种新型重组(R)‑ω‑转氨酶、突变体及其在制备西他列汀中的应用，该新型重组(R)‑ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第214位和第146位经单点或二点突变得到。本发明先通过基因重组技术获得高酶活的新型重组(R)‑ω‑转氨酶，再进一步通过定点突变获得新型重组(R)‑ω‑转氨酶突变体，该突变体不仅具有高酶活(785.2U/g)、高立体选择特性(e.e.值99.9％)，而且能够高效催化前体酮底物制备西他列汀，转化率最高可达97.1％。
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公开(公告)号：CN111411095B
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202010277479.9
申请日：2020-04-10
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种新型重组(R)‑ω‑转氨酶及其突变体和应用，该新型重组(R)‑ω‑转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第72位和第248位经单点或二点突变得到。本发明先通过基因重组技术获得高酶活的新型重组(R)‑ω‑转氨酶，再进一步通过定点突变获得新型重组(R)‑ω‑转氨酶突变体，该突变体不仅具有高酶活(1245.2U/g)、高立体选择特性(e.e.值99.9％)，而且能够高效催化前体酮类似物制备西他列汀中间体，转化率最高可达97.4％。
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公开(公告)号：CN111411094A
公开(公告)日：2020-07-14
申请号：CN202010273576.0
申请日：2020-04-09
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江永太科技股份有限公司 , 浙江永太药业有限公司
Abstract: 本发明公开了一种(R)-ω-转氨酶突变体及其应用，该突变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第182位的亮氨酸、第79位精氨酸、第51位的谷氨酰胺、第149位的缬氨酸、第235位亮氨酸和第216位甘氨酸，经多点突变得到。本发明通过基因挖掘技术筛选新型的(R)-ω-TA酶，并通过蛋白质工程技术进行分子改造，获得了高酶活、高底物耐受性和高立体选择性的(R)-ω-TA突变体催化剂，该突变体能够生物催化前体酮类似物1-(3-氧吡咯烷-1-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1,3-丁二酮合成西他列汀中间体(R)-1-[3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基]吡咯-3-酮，且转化率较高，最高可达到95.4％，对于突破西他列汀生物催化制备技术具有里程碑意义。
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公开(公告)号：CN110904066B
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN201911309350.5
申请日：2019-12-18
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种重组R‑ω‑转氨酶及突变体，以及其在不对称合成西他列汀中的应用。本发明筛选新型R‑ω‑转氨酶，并与现有的高效转氨酶重组，获得的重组体的氨基酸序列如SEQ ID:15所示，其突变体是将SEQ ID:15所示的氨基酸序列的第71、135、或292中的一个或者多个进行单位点突变或多位点突变获得的，最佳的R‑ω‑转氨酶突变株的氨基酸序列如SEQ ID:17所示，对应的核苷酸序列如SEQ ID:18所示。本发明提供了具有更高活性(582.4U/g)和立体选择性(e.e.值99.9％)的R‑ω‑TA突变体，可催化500mM底物转化为西他列汀，转化率高达99％，对于提升西他列汀生物催化制备技术具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109609478A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201910033474.9
申请日：2019-01-14
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种新型转氨酶及其高活力突变体在制备L-草铵膦中的应用，转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID:5所示，其突变体是将SEQ ID:5所示的氨基酸序列的第124、144、237、250、和328位中的一个或者多个进行单位点突变或多位点突变获得的。本发明实现高转化率转氨酶活力突变体基因的高效表达，酶活最高为840U/mg。本发明中所述转氨酶突变体的最适反应温度最高达到67℃，在该温度下催化800mM草铵膦前体酮利用无机胺正丁胺不对称合成L-草铵膦中，转化率高达100％。该AcTA突变体解决了当前转氨酶制备L-草铵膦工艺中，酶源少、酶活低、底物耐受性和氨基供体昂贵等技术难题，具有较好应用前景。
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