基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN111235172A

    公开(公告)日:2020-06-05

    申请号:CN202010113295.9

    申请日:2020-02-24

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统,该报告系统包括源自pFLX107的pUC复制子,Cat基因,rrnbT1T2,lambda t0转录终止子,源自质粒pRCL且内部ClaI、SacI和NdeI位点被沉默突变的lacZ基因。本发明还公开原核启动子报告系统的构建方法及应用。本发明构建的质粒pFGH06大小为4949bp,28℃培养条件下的背景活性仅为12.2±0.6,极显著低于低拷贝参考质粒pRCL的背景活性21.3±1.7,并应用于诱导型启动子araBAD和组成型启动子rpsM的克隆及活性测定,在模拟应用于启动子筛选时,可通过蓝白斑筛选实现对目标启动子的100%识别。

    一种基于λcI857/pL的对热稳定温控裂解系统及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN106480079B

    公开(公告)日:2019-09-03

    申请号:CN201610896463.X

    申请日:2016-10-13

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明属于生物工程领域,具体涉及一种基于λcI857/pL的对热稳定温控裂解系统及其构建方法和应用。本发明公开的基于λcI857/pL的对热稳定温控裂解系统,即质粒pKF396ML,其序列如SEQ ID NO.1所示。所述质粒pKF396ML是将裂解基因E克隆至质粒pKF396M‑5中启动子pL后的EcoRI和KpnI酶切位点之间,再通过重叠PCR将启动子pL的‑35位碱基由T定点突变为C而得到。该系统在37℃温度下仍能稳定抑制基因E的表达,而当温度超过其最高阻遏温度时仍能正常诱导细菌的裂解,有利于细菌的快速生长和表面重要抗原决定簇的保持,并能降低传统诱导方式(28℃→42℃)所致的热激反应。

    一种基于λcI857/pL 的对热稳定温控裂解系统及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN106480079A

    公开(公告)日:2017-03-08

    申请号:CN201610896463.X

    申请日:2016-10-13

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明属于生物工程领域,具体涉及一种基于λcI857/pL的对热稳定温控裂解系统及其构建方法和应用。本发明公开的基于λcI857/pL的对热稳定温控裂解系统,即质粒pKF396ML,其序列如SEQ ID NO.1所示。所述质粒pKF396ML是将裂解基因E克隆至质粒pKF396M-5中启动子pL后的EcoRI和KpnI酶切位点之间,再通过重叠PCR将启动子pL的-35位碱基由T定点突变为C而得到。该系统在37℃温度下仍能稳定抑制基因E的表达,而当温度超过其最高阻遏温度时仍能正常诱导细菌的裂解,有利于细菌的快速生长和表面重要抗原决定簇的保持,并能降低传统诱导方式(28℃→42℃)所致的热激反应。

    一种温控零背景T载体前体及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN103497965A

    公开(公告)日:2014-01-08

    申请号:CN201310488129.7

    申请日:2013-10-17

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及一种温控零背景T载体前体及其构建方法和应用。所述温控零背景T载体前体,是载体pFLX107,其序列如SEQ ID NO.1所示。构建成功的载体体积为3029bp,经XcmI酶切制备而成的T载体体积仅2747bp,与当今市场上的各类商用T载体体积相近,可广泛应用于各类外源PCR片段的TA克隆。由于温控致死基因的存在,在37℃温度下即可实现对重组转化子100%的阳性克隆筛选。同时由于在载体中克隆位点两侧集成了可由生物公司免费提供的通用测序引物序列结合位点,在送样测序时无需再自备引物,进一步降低了成本。

    基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN111235172B

    公开(公告)日:2021-10-19

    申请号:CN202010113295.9

    申请日:2020-02-24

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统,该报告系统包括源自pFLX107的pUC复制子,Cat基因,rrnbT1T2,lambda t0转录终止子,源自质粒pRCL且内部ClaI、SacI和NdeI位点被沉默突变的lacZ基因。本发明还公开原核启动子报告系统的构建方法及应用。本发明构建的质粒pFGH06大小为4949bp,28℃培养条件下的背景活性仅为12.2±0.6,极显著低于低拷贝参考质粒pRCL的背景活性21.3±1.7,并应用于诱导型启动子araBAD和组成型启动子rpsM的克隆及活性测定,在模拟应用于启动子筛选时,可通过蓝白斑筛选实现对目标启动子的100%识别。

    一种温控零背景T载体前体及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN103497965B

    公开(公告)日:2015-01-07

    申请号:CN201310488129.7

    申请日:2013-10-17

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明涉及一种温控零背景T载体前体及其构建方法和应用。所述温控零背景T载体前体,是载体pFLX107,其序列如SEQ ID NO.1所示。构建成功的载体体积为3029bp,经XcmI酶切制备而成的T载体体积仅2747bp,与当今市场上的各类商用T载体体积相近,可广泛应用于各类外源PCR片段的TA克隆。由于温控致死基因的存在,在37℃温度下即可实现对重组转化子100%的阳性克隆筛选。同时由于在载体中克隆位点两侧集成了可由生物公司免费提供的通用测序引物序列结合位点,在送样测序时无需再自备引物,进一步降低了成本。

    一种抗对虾幼体弧菌病微胶囊饲料

    公开(公告)号:CN105166574A

    公开(公告)日:2015-12-23

    申请号:CN201510667819.8

    申请日:2015-10-16

    Applicant: 扬州大学

    Abstract: 本发明公开了一种抗对虾幼体弧菌病微胶囊饲料,该微胶囊饲料由三种原料组成,抗对虾幼体弧菌病卵黄抗体冻干粉、黄芪粉及β-环糊精;其中抗对虾幼体弧菌病卵黄抗体冻干粉,主要是使对虾幼体降低或免受副溶血弧菌及哈氏弧菌的感染,黄芪粉是提高对虾幼体免疫力,β-环糊精主要是使卵黄抗体冻干粉起到包埋缓释作用。该微胶囊饲料将所获得的抗体效价在210的抗对虾幼体弧菌病卵黄抗体冻干粉80~85%、黄芪粉10%~12%,β-环糊精(5~8%)经喷雾干燥制得微胶囊干粉,该微胶囊饲料按一定的比例与市售虾片一起投喂使用,能预防与治疗对虾幼体培育期间由病原副溶血弧菌及哈氏弧菌引起的疾病,增加对虾育苗产量,显著地提高对虾育苗生产的经济效益。解决目前对虾育苗生产过程中易发生弧菌病的问题。

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