公开(公告)号：CN111235172B

公开(公告)日：2021-10-19

申请号：CN202010113295.9

申请日：2020-02-24

Applicant: 扬州大学

Inventor： 付立霞 ,  徐敬潇 ,  杨辉 ,  黄志斌 ,  龚建森 ,  韩先干

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统，该报告系统包括源自pFLX107的pUC复制子，Cat基因，rrnbT1T2，lambda t0转录终止子，源自质粒pRCL且内部ClaI、SacI和NdeI位点被沉默突变的lacZ基因。本发明还公开原核启动子报告系统的构建方法及应用。本发明构建的质粒pFGH06大小为4949bp，28℃培养条件下的背景活性仅为12.2±0.6，极显著低于低拷贝参考质粒pRCL的背景活性21.3±1.7，并应用于诱导型启动子araBAD和组成型启动子rpsM的克隆及活性测定，在模拟应用于启动子筛选时，可通过蓝白斑筛选实现对目标启动子的100%识别。

公开(公告)号：CN111235172A

公开(公告)日：2020-06-05

申请号：CN202010113295.9

申请日：2020-02-24

Applicant: 扬州大学

Inventor： 付立霞 ,  徐敬潇 ,  杨辉 ,  黄志斌 ,  龚建森 ,  韩先干

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/65 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开基于lacZ基因和pUC复制子的原核启动子报告系统，该报告系统包括源自pFLX107的pUC复制子，Cat基因，rrnbT1T2，lambda t0转录终止子，源自质粒pRCL且内部ClaI、SacI和NdeI位点被沉默突变的lacZ基因。本发明还公开原核启动子报告系统的构建方法及应用。本发明构建的质粒pFGH06大小为4949bp，28℃培养条件下的背景活性仅为12.2±0.6，极显著低于低拷贝参考质粒pRCL的背景活性21.3±1.7，并应用于诱导型启动子araBAD和组成型启动子rpsM的克隆及活性测定，在模拟应用于启动子筛选时，可通过蓝白斑筛选实现对目标启动子的100%识别。