公开(公告)号：CN106480079B

公开(公告)日：2019-09-03

申请号：CN201610896463.X

申请日：2016-10-13

Applicant: 扬州大学

Inventor： 付立霞 ,  高波 ,  王柳富 ,  韩先干 ,  魏文志

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/33 ,  C12N1/06

Abstract: 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种基于λcI857/pL的对热稳定温控裂解系统及其构建方法和应用。本发明公开的基于λcI857/pL的对热稳定温控裂解系统，即质粒pKF396ML，其序列如SEQ ID NO.1所示。所述质粒pKF396ML是将裂解基因E克隆至质粒pKF396M‑5中启动子pL后的EcoRI和KpnI酶切位点之间，再通过重叠PCR将启动子pL的‑35位碱基由T定点突变为C而得到。该系统在37℃温度下仍能稳定抑制基因E的表达，而当温度超过其最高阻遏温度时仍能正常诱导细菌的裂解，有利于细菌的快速生长和表面重要抗原决定簇的保持，并能降低传统诱导方式(28℃→42℃)所致的热激反应。

公开(公告)号：CN106480079A

公开(公告)日：2017-03-08

申请号：CN201610896463.X

申请日：2016-10-13

Applicant: 扬州大学

Inventor： 付立霞 ,  高波 ,  王柳富 ,  韩先干 ,  魏文志

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N15/33 ,  C12N1/06

Abstract: 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种基于λcI857/pL的对热稳定温控裂解系统及其构建方法和应用。本发明公开的基于λcI857/pL的对热稳定温控裂解系统，即质粒pKF396ML，其序列如SEQ ID NO.1所示。所述质粒pKF396ML是将裂解基因E克隆至质粒pKF396M-5中启动子pL后的EcoRI和KpnI酶切位点之间，再通过重叠PCR将启动子pL的-35位碱基由T定点突变为C而得到。该系统在37℃温度下仍能稳定抑制基因E的表达，而当温度超过其最高阻遏温度时仍能正常诱导细菌的裂解，有利于细菌的快速生长和表面重要抗原决定簇的保持，并能降低传统诱导方式(28℃→42℃)所致的热激反应。