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公开(公告)号：CN116444682B
公开(公告)日：2023-12-08
申请号：CN202310342828.4
申请日：2023-03-31
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/867 , C12N5/10 , A61K39/395 , A61K39/385 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种靶向降解PRRSV关键复制酶的生物型蛋白降解靶向嵌合体及其应用。所述的生物型蛋白降解靶向嵌合体由1至多个PRRSVnsp9纳米抗体nsp9nb及/或nsp2纳米抗体nsp2nb串联后再与E3泛素连接酶接头蛋白SPOP中BTB结构域融合后得到。本发明利用筛选出的特异性结合PRRSV关键复制酶Nsp2，Nsp9蛋白的纳米抗体，并用纳米抗体替代E3泛素连接酶复合体(SPOP)底物识别结构域，构建靶向降解PRRSV关键复制酶的生物型蛋白降解靶向嵌合体。本发明的提出为PRRS的治疗以及抗PRRS育种提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN111057145A
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN201911157547.1
申请日：2019-11-22
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白纳米抗体及其应用。所述的纳米抗体命名为Nb12，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明将截短表达的Nsp2重组蛋白免疫骆驼后分离骆驼外周血淋巴细胞利用RT-PCR扩增经过免疫的双峰驼VHH基因，将其连入pCANTAB 5E噬菌体载体，构建双峰驼重链抗体可变区文库，利用噬菌体展示技术经过3轮淘选，共筛选到44株Nsp2特异性纳米抗体，试验证明这些纳米抗体能够与Nsp2蛋白特异性反应，其中Nb12有较强的结合力。抗病毒试验结果表明在接毒量为0.01个MOI时，纳米抗体Nb12在PAM细胞和Marc-145细胞上均显示出对病毒复制的抑制作用。因此，本发明的提出为后续PRRSV Nsp2的研究以及PRRSV的防控和诊断提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN112011556B
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN202010780803.9
申请日：2020-08-06
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K14/01 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/18 , C07K1/16 , A61K39/12 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗及其制备和应用。本发明对猪圆环病毒2b和2d的衣壳蛋白基因进行了突变改造和优化，大大提高了猪圆环病毒2b和2d衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达水平和组装成病毒样颗粒的产量，病毒样颗粒的纯化工艺较简单，易于大规模生产，成本较低。本发明提供的猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗的免疫保护效果均优于猪圆环病毒2b的单价病毒样颗粒疫苗和猪圆环病毒2d的单价病毒样颗粒疫苗，且安全、有效、质量可控、成本较低，对于猪圆环病毒2型引起的相关疾病的防控提供了方便且更为有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN112011556A
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN202010780803.9
申请日：2020-08-06
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/34 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K14/01 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/18 , C07K1/16 , A61K39/12 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗及其制备和应用。本发明对猪圆环病毒2b和2d的衣壳蛋白基因进行了突变改造和优化，大大提高了猪圆环病毒2b和2d衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达水平和组装成病毒样颗粒的产量，病毒样颗粒的纯化工艺较简单，易于大规模生产，成本较低。本发明提供的猪圆环病毒2b、2d型二价病毒样颗粒疫苗的免疫保护效果均优于猪圆环病毒2b的单价病毒样颗粒疫苗和猪圆环病毒2d的单价病毒样颗粒疫苗，且安全、有效、质量可控、成本较低，对于猪圆环病毒2型引起的相关疾病的防控提供了方便且更为有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN114891095B
公开(公告)日：2023-09-01
申请号：CN202210382554.7
申请日：2022-04-13
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K16/10 , C07K19/00 , G01N33/569 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种用于检测PRRSV抗原的纳米抗体对、试剂盒及其应用，属于生物技术检测技术领域。为了提供一种特异性检测PRRS病毒的抗体对。本发明提供了一种用于检测PRRSV抗原的Nb12抗体和N35抗体，Nb12抗体的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7‑9，N35抗体可变区序列如SEQ ID NO:10‑12。抗体对能特异性识别PRRSV抗原，最低检测1.0×103TCID50/100μL病毒。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114891095A
公开(公告)日：2022-08-12
申请号：CN202210382554.7
申请日：2022-04-13
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K16/10 , C07K19/00 , G01N33/569 , G01N33/68
Abstract: 本发明公开了一种用于检测PRRSV抗原的纳米抗体对、试剂盒及其应用，属于生物技术检测技术领域。为了提供一种特异性检测PRRS病毒的抗体对。本发明提供了一种用于检测PRRSV抗原的Nb12抗体和N35抗体，Nb12抗体的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7‑9，N35抗体可变区序列如SEQ ID NO:10‑12。抗体对能特异性识别PRRSV抗原，最低检测1.0×103TCID50/100μL病毒。
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公开(公告)号：CN117965585B
公开(公告)日：2024-07-16
申请号：CN202410370650.9
申请日：2024-03-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/62 , C07K19/00 , C12N15/70 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/34 , C07K1/18 , C07K1/16 , A61K39/12 , A61K39/39 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 猪圆环病毒2d型佐剂嵌合病毒样颗粒疫苗及其制备方法，属于生物制药技术领域。解决了PCV2d型病毒样颗粒在大肠杆菌中难以高效和可溶性表达，抗体产生时间较长等问题。本发明通过在PCV2d的ORF2基因优化序列的N端添加C3d特异性表位基因序列来提高猪圆环病毒2d型佐剂嵌合病毒样颗粒疫苗的免疫效果，基于该方法获得了核苷酸序列SEQ2。进一步，通过将PCV2d的ORF2基因序列优化并在N端添加C3d特异性表位基因序列，插入pET28a载体，再转化到大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达蛋白rC3d‑Cap。最后，疫苗的制备方法是将所述蛋白rC3d‑Cap通过硫酸铵沉淀技术、AKTA蛋白纯化系统和分子筛进行纯化，在与水包油佐剂进行乳化，获得的一种猪圆环病毒PCV2d病毒样颗粒疫苗。本发明适用于疫苗生产加工技术领域。
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公开(公告)号：CN117965585A
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202410370650.9
申请日：2024-03-29
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) , 哈尔滨维科生物技术有限公司
IPC: C12N15/62 , C07K19/00 , C12N15/70 , C07K1/36 , C07K1/30 , C07K1/34 , C07K1/18 , C07K1/16 , A61K39/12 , A61K39/39 , A61P31/20 , C12R1/19
Abstract: 猪圆环病毒2d型佐剂嵌合病毒样颗粒疫苗及其制备方法，属于生物制药技术领域。解决了PCV2d型病毒样颗粒在大肠杆菌中难以高效和可溶性表达，抗体产生时间较长等问题。本发明通过在PCV2d的ORF2基因优化序列的N端添加C3d特异性表位基因序列来提高猪圆环病毒2d型佐剂嵌合病毒样颗粒疫苗的免疫效果，基于该方法获得了核苷酸序列SEQ2。进一步，通过将PCV2d的ORF2基因序列优化并在N端添加C3d特异性表位基因序列，插入pET28a载体，再转化到大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达蛋白rC3d‑Cap。最后，疫苗的制备方法是将所述蛋白rC3d‑Cap通过硫酸铵沉淀技术、AKTA蛋白纯化系统和分子筛进行纯化，在与水包油佐剂进行乳化，获得的一种猪圆环病毒PCV2d病毒样颗粒疫苗。本发明适用于疫苗生产加工技术领域。
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公开(公告)号：CN114656553A
公开(公告)日：2022-06-24
申请号：CN202210267146.7
申请日：2022-03-17
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
IPC: C07K16/08 , C12N5/20 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一株识别非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)P72蛋白的单克隆抗体、含有该单克隆抗体的试剂盒及其应用。其中，能够特异性识别并阻断ASFV P72抗体的单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.45030的杂交瘤细胞株分泌产生。通过间接免疫荧光实验和WB试验，鉴定所得到的单克隆抗体特异性识别P72蛋白构象表位，阻断ELISA试验结果表明，该单克隆抗体可以竞争性阻断猪血清中ASFV抗体与P72蛋白结合。本发明以偶联HRP单克隆抗体为竞争抗体，建立了一种阻断ELISA方法，该ELISA方法可以特异性检测ASFV感染的猪血清中抗体水平，操作简便，特异性好，敏感性高。本发明为ASFV感染的临床诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。
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公开(公告)号：CN111057145B
公开(公告)日：2021-10-08
申请号：CN201911157547.1
申请日：2019-11-22
Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2蛋白纳米抗体及其应用。所述的纳米抗体命名为Nb12，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明将截短表达的Nsp2重组蛋白免疫骆驼后分离骆驼外周血淋巴细胞利用RT‑PCR扩增经过免疫的双峰驼VHH基因，将其连入pCANTAB 5E噬菌体载体，构建双峰驼重链抗体可变区文库，利用噬菌体展示技术经过3轮淘选，共筛选到44株Nsp2特异性纳米抗体，试验证明这些纳米抗体能够与Nsp2蛋白特异性反应，其中Nb12有较强的结合力。抗病毒试验结果表明在接毒量为0.01个MOI时，纳米抗体Nb12在PAM细胞和Marc‑145细胞上均显示出对病毒复制的抑制作用。因此，本发明的提出为后续PRRSV Nsp2的研究以及PRRSV的防控和诊断提供了新的技术手段。
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