本发明公开了一种共表达猪β‑防御素2与PEDV S1蛋白的重组猪源干酪乳杆菌及其构建方法和应用，属于生物技术领域。本发明以前期构建的表达PEDV S1基因的猪源营养缺陷型副干酪乳杆菌作为口服黏膜传递载体，并通过串联提高pBD2蛋白的外源表达量，构建重组乳杆菌n×pBD2/S1‑ΔHLJ‑27。针对PEDV的肠道黏膜感染，通过该重组乳杆菌对S1蛋白的组成型表达，刺激黏膜特异性免疫应答，从而建立阻断PEDV感染的第一道防线；与此同时，为了增强口服疫苗诱导的黏膜免疫效果，利用该重组乳杆菌进行分泌表达串联的pBD2蛋白，通过外源增加pBD2表达量来增强肠道免疫应答，提高机体获得性免疫水平，进而将口服黏膜疫苗的优势发挥更佳。