本发明属于生物医药技术领域，公开一种肿瘤新抗原DNA疫苗，具体的，所述DNA疫苗以PVAX1为原始载体，于PVAX1的酶切位点Hind III和Not I之间设置有抗原表达单元，所述抗原表达单元从Hind III位点的右边界顺序依次为Kozak、Signal peptides、Ubiquitous、BamHI、EcoRI、F2A和GM‑CSF，所述抗原表达单元BamHI和EcoRI酶切位点之间插入有TMGs序列，本发明设计的疫苗可以显著减缓肿瘤的生长速度，改善疫苗发挥作用时的免疫微环境，招募更多的免疫细胞，提高疫苗的有效性。