本发明提供了一种副干酪乳杆菌增殖培养基、培养方法及应用。增殖培养基包括以下浓度的组分：5.0g/L~100.0g/L碳源，27.0g/L~34.0g/L氮源，3.0g/L~8.0g/L乙酸钠，0.8g/L~3.1g/L柠檬酸二铵，1.1g/L~3.2g/L吐温80，0.2g/L~0.9g/L玉米浆，0.32g/L~0.81g/L硫酸镁以及0.12g/L~0.37g/L硫酸锰。培养方法包括：配制种子培养液；按副干酪乳杆菌增殖培养基进行配置；对种子培养液进行离心处理，重悬后接种至副干酪乳杆菌增殖培养基中培养。本发明的培养基成分简单、价格低廉，可以大幅度降低副干酪乳杆菌在工业化生产应用中的成本。