本发明提供了一种牛病毒性腹泻病毒E0蛋白氨基酸及制备方法，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。制备方法包括以下步骤：S1、从NCBI GenBank中获取BVDV NADL全基因组序列，从中找出BVDV E0基因序列；S2、对步骤S1得到的E0基因序列进行优化与合成；S3、选择带有MBP标签原核表达载体pMal-c5X，将E0基因与pMal-c5X进行连接，将E0片段插入pMal-c5X；然后将连接好的表达载体pMAL-c5x-E0转化进表达宿主菌BL21(DE3)，并诱导表达重组蛋白，分离纯化目的蛋白。本发明通过优化目的基因E0，并与MBP标签蛋白融合表达，最终达到E0蛋白的高效可溶性表达，具有表达产量高、可溶性好、表达蛋白提纯方便等优点，当外源蛋白与MBP融合表达时更能提高大肠杆菌表达蛋白的可溶性，这为表达蛋白的纯化提供了便利。