公开(公告)号：CN106676111A

公开(公告)日：2017-05-17

申请号：CN201710096677.3

申请日：2017-02-22

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 邓威威 ,  王荣秀 ,  张正竹 ,  江丽娜 ,  袁艳

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  A01H5/00

CPC classification number: C12N9/1007 ,  C12N15/8205 ,  C12N15/8243 ,  C12Y201/0116

Abstract: 本发明提供茶树咖啡碱合成酶基因启动子TCSP及其在制备转基因植物中的应用。本发明以茶树DNA为模板，用Genome Walking方法克隆得到茶树TCS基因启动子序列，然后利用Gateway技术构建重组植物表达载体pKGWFS7‑TCSP，采用农杆菌介导的烟草遗传转化，以表达GUS基因的方式进行启动子活性功能验证。本发明首次从茶树中克隆出特异性咖啡碱合成酶基因启动子TCSP，并验证了其活性，对于揭示茶树咖啡碱合成的机理，生物调控茶树咖啡碱的含量具有重要意义。

公开(公告)号：CN106085941A

公开(公告)日：2016-11-09

申请号：CN201610475884.5

申请日：2016-06-22

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 张正竹 ,  李萌萌 ,  邓威威 ,  宁井铭 ,  邓骋

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/77 ,  C12P17/18 ,  C12R1/15

CPC classification number: C12N9/1007 ,  C12P17/182 ,  C12Y201/0116

Abstract: 本发明提供一种提高重组谷氨酸棒状杆菌发酵生产咖啡碱产量的方法，以含有咖啡碱生物合成途径中关键酶基因CaXMT和TCS1的重组谷氨酸棒状杆菌作为发酵菌株，通过向发酵液中添加前体物质黄嘌呤核苷，并采用加压方式对重组菌细胞进行通透化处理，促进重组工程菌对底物黄嘌呤核苷的吸收，在表达的活性蛋白的催化作用下，使底物黄嘌呤核苷经过三次甲基化反应和一次核苷水解反应，最终生成咖啡碱。本发明通过改变细胞的通透性，促进底物的吸收，操作步骤简单、产品纯度高，为利用微生物工业化发酵生产咖啡碱奠定了理论基础。