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公开(公告)号：CN117802032A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202311522379.8
申请日：2023-11-15
申请人： 金宇保灵生物药品有限公司
发明人： 陈坚 , 俎红丽 , 蔺建平 , 吉格木德 , 齐志涛 , 孙慧 , 王娥娥 , 任健孚 , 李欣 , 吴梦甜 , 宋志刚 , 李超 , 李晓艳 , 杨青春 , 贺瑶 , 辛俊利 , 王岩 , 王秉昆 , 王华 , 赵丽霞 , 李劼 , 赵明治 , 关平原
摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体公开了一株全悬浮无血清型ST细胞及其驯化方法与应用。本发明方法包括：将待驯化ST细胞先以含丙酮酸钠和胎牛血清的DMEM培养基培养，之后以逐渐降低胎牛血清含量的培养基进行降血清驯化培养，获得待悬浮驯化ST细胞；将其以无血清培养基进行连续传代悬浮驯化培养；若出现了5～8个以上的ST细胞结为一团并且ST细胞出现挂壁情况时，则添加硫酸葡聚糖钠盐并提高培养转速；若情况无改善，则以胰酶对结团细胞进行多次消化；若存在不易消化的细胞团，则采用过细胞筛的方法进行处理。本发明驯化后的ST悬浮细胞可应用于猪丁型冠状病毒的培养和后续疫苗的制备。
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公开(公告)号：CN117264873A
公开(公告)日：2023-12-22
申请号：CN202311233637.0
申请日：2023-09-22
申请人： 金宇保灵生物药品有限公司
发明人： 俎红丽 , 武瑾贤 , 谢雪岑 , 郝鹏 , 蔺建平 , 王子涵 , 孙慧 , 王娥娥 , 任健孚 , 齐志涛 , 宋志刚 , 李超 , 李晓艳 , 杨青春 , 贺瑶 , 辛俊利 , 王岩 , 王秉昆 , 吉格木德 , 刘瑞明 , 乔煜婷 , 王华 , 陈坚 , 赵明治 , 关平原
摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种Marc145细胞的悬浮驯化方法及应用。悬浮驯化方法包括：采用293Pro 293S无血清培养基和Tac‑S101BHK细胞无血清培养基的混合培养基培养Marc145细胞。本发明的Marc145细胞的悬浮驯化方法，能够使得Marc145贴壁细胞成功实现悬浮驯化，Marc145悬浮细胞生长速度快，细胞生长状态稳定，细胞分散好，大小均一，Marc145悬浮细胞对猪蓝耳病毒(PRRSV)敏感性高，能够稳定产毒，适合对猪蓝耳病毒进行大规模生产，为猪蓝耳病毒疫苗的研发提供了基础。
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公开(公告)号：CN116769697A
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202310749406.9
申请日：2023-06-25
申请人： 金宇保灵生物药品有限公司
发明人： 俎红丽 , 蔺建平 , 陈坚 , 赵明治 , 赵丽霞 , 关平原 , 谢雪岑 , 孙慧 , 王娥娥 , 任健孚 , 杨青春 , 宋志刚 , 王秉昆 , 李超 , 齐志涛 , 李晓艳 , 贺瑶 , 吉格木德 , 张建宏 , 王华
IPC分类号： C12N5/071 , C12N7/00 , C12N5/02 , A61K39/215 , A61P31/14
摘要： 本发明公开了一种适合无血清全悬浮的SIEC‑S细胞及培养驯化方法，属于SIEC‑S细胞培养技术领域，SIEC‑S细胞于2022年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.45338，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为猪小肠粘膜上皮悬浮细胞；SIEC‑S细胞直接在无血清的CD培养基中生长，减少了血清的使用量，降低了成本，SIEC‑S可在生物反应器上悬浮大规模培养，提高了下游疫苗抗原含量的得率。
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公开(公告)号：CN113406337B
公开(公告)日：2024-05-14
申请号：CN202110697711.9
申请日：2021-06-23
申请人： 金宇保灵生物药品有限公司
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/577 , C12N5/071
摘要： 本发明公开一种能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc‑145细胞株的筛选方法，属于生物工程技术领域。本发明提供的方法包括利用间接免疫荧光法检测由候选Marc‑145单克隆细胞株繁殖形成的Marc‑145单克隆细胞群中细胞表面存在CD163受体的细胞占Marc‑145细胞群的百分比，再根据该百分比筛选出能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc‑145细胞株，具有快速、方便、客观、准确的优势，还能够基于此预测由Marc‑145细胞群培养PRRSV获得的病毒液中病毒含量，可以指导疫苗生产。
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公开(公告)号：CN117802128A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202410003551.7
申请日：2024-01-02
申请人： 金宇保灵生物药品有限公司
摘要： 本发明涉及生物基因表达技术领域，尤其涉及一种提高E2蛋白表达量的重组基因及应用。本发明所述重组基因由信号肽的基因序列与E2蛋白的基因序列顺次连接得到，其中，所述E2蛋白的基因序列经密码子优化，可在重组细胞中高效表达。另外，本发明提供的重组基因引入了信号肽序列，所述信号肽序列与密码子优化后的E2蛋白基因序列连接后，E2蛋白的表达量显著提升。
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公开(公告)号：CN117305393B
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202311597272.X
申请日：2023-11-28
申请人： 金宇保灵生物药品有限公司
摘要： 本发明涉及兽用疫苗及微生物细胞培养技术领域，尤其涉及一种提高CSFV‑E2蛋白表达量的培养基的应用。本发明所述提高CSFV‑E2蛋白表达量的培养基，以CD CHO 011为基础培养基，添加8‑12mM的L‑精氨酸。该培养基能极大程度地提升细胞活率和培养后期的活细胞数量，提高CSFV‑E2蛋白的表达量。本发明在使用前述培养基发酵生产CSFV‑E2蛋白的过程中，添加CD Feed 002营养补充剂，有助于降低因前期添加L‑精氨酸导致的细胞代谢产物积聚，进而减少代谢产物对细胞后期生长和蛋白表达造成的不利影响。
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公开(公告)号：CN117305393A
公开(公告)日：2023-12-29
申请号：CN202311597272.X
申请日：2023-11-28
申请人： 金宇保灵生物药品有限公司
摘要： 本发明涉及兽用疫苗及微生物细胞培养技术领域，尤其涉及一种提高CSFV‑E2蛋白表达量的培养基的应用。本发明所述提高CSFV‑E2蛋白表达量的培养基，以CD CHO 011为基础培养基，添加8‑12mM的L‑精氨酸。该培养基能极大程度地提升细胞活率和培养后期的活细胞数量，提高CSFV‑E2蛋白的表达量。本发明在使用前述培养基发酵生产CSFV‑E2蛋白的过程中，添加CD Feed 002营养补充剂，有助于降低因前期添加L‑精氨酸导致的细胞代谢产物积聚，进而减少代谢产物对细胞后期生长和蛋白表达造成的不利影响。
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公开(公告)号：CN113406337A
公开(公告)日：2021-09-17
申请号：CN202110697711.9
申请日：2021-06-23
申请人： 金宇保灵生物药品有限公司
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/577 , C12N5/071
摘要： 本发明公开一种能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc‑145细胞株的筛选方法，属于生物工程技术领域。本发明提供的方法包括利用间接免疫荧光法检测由候选Marc‑145单克隆细胞株繁殖形成的Marc‑145单克隆细胞群中细胞表面存在CD163受体的细胞占Marc‑145细胞群的百分比，再根据该百分比筛选出能够用于培养PRRSV获得高病毒含量病毒液的Marc‑145细胞株，具有快速、方便、客观、准确的优势，还能够基于此预测由Marc‑145细胞群培养PRRSV获得的病毒液中病毒含量，可以指导疫苗生产。
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公开(公告)号：CN115322955A
公开(公告)日：2022-11-11
申请号：CN202211156088.7
申请日：2022-09-22
申请人： 金宇保灵生物药品有限公司
发明人： 陈坚 , 齐志涛 , 吉格木德 , 陈九连 , 张燕红 , 孙慧 , 王娥娥 , 俎红丽 , 刘玉梅 , 赵丽霞 , 李劼 , 路荣 , 方建国 , 高艳华 , 屠颉 , 杨波 , 闫聪 , 乔煜婷 , 田瑞霞 , 杜宇荣 , 李雪峰 , 范培超 , 刘瑞明 , 王华 , 张建宏
摘要： 本发明公开了一种全悬浮无血清型PK‑15细胞的驯化方法，属于兽用生物制品领域。本发明提供的驯化方法包括以下步骤：贴壁型PK‑15细胞的培养—全悬浮型PK‑15细胞的驯化—全悬浮无血清型PK‑15细胞的驯化，其中在培养基中含9‑11％新生牛血清的条件下将贴壁型PK‑15细胞驯化为全悬浮型PK‑15细胞，并在全悬浮无血清型PK‑15细胞的驯化步骤中逐渐降低培养基中的血清浓度至血清浓度为0％，能够驯化获得可稳定传代培养的全悬浮无血清型PK‑15细胞。利用该全悬浮无血清型PK‑15细胞可大规模悬浮培养获得TCID50达10‑7/0.1ml以上的塞内卡病毒培养液。
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