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发明公开
人补体片段C5a基因及其克隆、重组蛋白表达方法无效

公开(公告)号：CN101906416A

公开(公告)日：2010-12-08

申请号：CN200910011854.9

申请日：2009-06-04

申请人： 辽宁师范大学

发明人： 李庆伟 , 吴芬芳 , 张宁 , 王华颖

IPC分类号： C12N15/11 , C12N15/12 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K14/435 , C12R1/19

摘要： 本发明涉及人补体片段C5a在大肠杆菌表达系统中的克隆和表达，以及表达产物的纯化和生物活性。包括：根据大肠杆菌偏爱密码子设计并合成一组引物，通过重叠PCR的方法获得C5a的DNA片段，将其克隆于硫氧还蛋白融合表达载体pET32a中，表达的融合蛋白以胞浆可溶性蛋白的形式存在。通过Ni2+亲和层析、肠激酶酶切和进一步纯化，得到高纯度的C5a蛋白。该蛋白对人中性粒细胞具有明显的趋化活性，能刺激人中性粒细胞呼吸爆发和分泌乳铁蛋白，并能诱导人单核细胞分泌IL-8。