公开(公告)号：CN118638835A

公开(公告)日：2024-09-13

申请号：CN202410925263.7

申请日：2024-07-11

申请人： 西部(重庆)科学城种质创制大科学中心

发明人： 吴荣华 ,  廖子怡 ,  龙瑞 ,  庞旭 ,  李云 ,  叶华

IPC分类号： C12N15/74 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  A61K39/02 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01

摘要： 本发明公开了一种嗜水气单胞菌pspC基因突变株的制备方法及应用，属于微生物技术领域，S1、提取嗜水气单胞菌全基因组，构建pspC基因敲除所使用的引物；S2、以所提取的嗜水气单胞菌全基因组为模板，使用引物进行目的基因上下游同源臂扩增和重叠延伸，得到缺失后的pspC基因片段；S3、缺失后的pspC基因片段导入自杀质粒pRE112，得到重组质粒pRE112‑ΔpspC；S4、将重组质粒pRE112‑ΔpspC转入E.coli sm10λ感受态细胞，通过接合转移构建同源重组突变株，再通过蔗糖压力筛选，得到所述嗜水气单胞菌突变株ΔpspC。本发明通过分子克隆技术、Overlap PCR技术和同源重组技术，利用自杀载体对嗜水气单胞菌pspC基因进行框内缺失突变，获得基因缺失的，且能稳定遗传的嗜水气单胞菌突变菌ΔpspC。