公开(公告)号：CN115261296A

公开(公告)日：2022-11-01

申请号：CN202210252107.X

申请日：2022-03-15

Applicant: 西南大学

Inventor： 万堃

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/57 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N9/48 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种表达氨肽酶M1AP的重组大肠杆菌及构建方法。本发明对氨肽酶基因M1AP进行克隆，成功构建C端融合His标签的M1AP重组表达质粒pET‑28a‑M1AP‑His，并以大肠杆菌作为氨肽酶M1AP的表达宿主。本发明获得的重组大肠杆菌在对M1AP基因的可溶性表达中，检测其细胞破碎上清液，氨肽酶的酶活可高达112.219U/mL，且纯化后纯度高。克服了大肠杆菌在表达有功效的外源蛋白体时，容易形成大量包涵体的缺点，成功实现其在大肠杆菌中更高效的可溶性表达。结合大肠杆菌生长速度快，培养周期短的特点，成功实现了短时间内大量生产氨肽酶的需求。

公开(公告)号：CN108977444A

公开(公告)日：2018-12-11

申请号：CN201810689608.8

申请日：2018-06-28

Applicant: 西南大学

Inventor： 焦寒伟 ,  万堃 ,  黄庆洲 ,  伍莉 ,  陈吉轩 ,  帅学宏 ,  赵宇 ,  王红均

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  A61K31/713 ,  A61P39/02 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明公开的一种沉默荣昌猪CD14表达的siRNA，通过先建立稳定表达荣昌猪CD14基因的CD14-增强型绿色荧光蛋白EGFP融合蛋白的猪肺泡巨噬细胞；然后合成四条位点不同的靶向CD14基因的siRNAs，再应用高效转染试剂将四条siRNAs，转染CD14-EGFP稳定细胞系；最后筛选出能高效抑制荣昌猪CD14基因表达的siRNAs，即第3条(669)siRNAs能够明显抑制荣昌猪CD14基因的表达，为开展靶向荣昌猪CD14的基因治疗荣昌猪内毒素休克、内毒素血症以及格兰氏阴性菌导致的炎症性疾病的相关研究提供了的理论依据。