公开(公告)号：CN117551804B

公开(公告)日：2024-11-22

申请号：CN202311516904.5

申请日：2023-11-15

Applicant: 西北农林科技大学 ,  西安黄氏生物工程有限公司

Inventor： 胡小平 ,  黄颖琪 ,  王强 ,  秦君 ,  黄卫利

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明适用于植物病原菌检测方法技术领域，提供了一种检测苹果黑星病菌的引物、试剂盒及其检测方法，检测苹果黑星病菌的RPA引物及CRISPR/Cas12a引物；检测苹果黑星病菌的试剂盒，包含上述引物、Cas12蛋白、T7转录酶、DNA聚合酶以及Cas12/13专用核酸检测试纸条。检测方法包括：利用RPA扩增产物、体外转录合成的指导RNA和FB探针建立CRISPR/Cas12a检测反应体系；反应结束后将Cas12/13专用核酸检测试纸条插入到反应管中，观察试纸条上检测线的变化；若在试纸条的测试条带上出现颜色变化，即为阳性反应，证明含有苹果黑星病菌。本发明特异性强、灵敏度高、结果准确且实用性高。

公开(公告)号：CN116479166A

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202310651295.8

申请日：2023-06-02

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 秦君 ,  黄颖琪 ,  廖西文 ,  胡小平 ,  商文静

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及大丽轮枝菌稳定表达的内参基因及其引物和应用。本发明以大丽轮枝菌H3基因、Tubulin基因、EF1a基因和GAPDH基因为候选基因，采用实时荧光定量PCR进行扩增，利用geNorm和NormFinder算法程序进行稳定性分析，并通过RefFinder在线分析工具进行综合分析，最后发现在大丽轮枝菌中Tubulin基因表达最为稳定。以Tubulin基因作为大丽轮枝菌荧光定量PCR检测中的内参基因能够达到校准的目的，准确定量检测大丽轮枝菌相关基因表达。

公开(公告)号：CN119492720A

公开(公告)日：2025-02-21

申请号：CN202510072181.7

申请日：2025-01-17

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 秦君 ,  张慧莹 ,  郭帅领 ,  李群琼 ,  俞皓楠 ,  胡小平

IPC: G01N21/64 ,  C12N15/82 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明涉及生物学技术领域，尤其涉及基于棉花根部表皮细胞检测病原菌效应蛋白定位的方法。所述方法包括以下步骤：构建携带病原菌效应蛋白编码基因和核定位信号的重组载体，将重组载体转入农杆菌菌株中，获得重组农杆菌；将重组农杆菌与病原菌共培养，筛选得到侵染菌株；用侵染菌株侵染棉花幼苗根部表皮，然后培养2～3天；将棉花幼苗根部表皮用DAPI溶液染色，制片后在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光信号，根据绿色荧光信号对效应蛋白进行定位。本发明的方法可快速高效地检测病原菌效应蛋白在棉花根部表皮中的定位，明确效应蛋白为质外体效应蛋白或细胞质效应蛋白，为棉花病原菌效应蛋白功能的研究提供技术支撑。

公开(公告)号：CN118879927A

公开(公告)日：2024-11-01

申请号：CN202411300795.8

申请日：2024-09-18

Applicant: 西北农林科技大学 ,  西安黄氏生物工程有限公司

Inventor： 胡小平 ,  张慧莹 ,  王强 ,  秦君 ,  黄卫利

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明提供了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测麦角病菌的引物，包括RPA上游引物、RPA下游引物和crRNA引物及通用引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示；还提供了试剂盒，包括基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测麦角病菌的引物、Cas12a蛋白、T7转录酶、DNA聚合酶、缓冲液、Cas12/13专用核酸检测试纸条；还提供了检测方法：首先提取待测样品DNA，然后用RPA上、下游引物通过RPA扩增技术扩增靶标序列，随后以RPA扩增产物和crRNA、Cas12a蛋白、FB探针建立RPA‑CRISPR/Cas12a检测体系，得到RPA‑CRISPR/Cas12a反应产物，用Cas12/13专用核酸检测试纸条进行检测。本发明基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测麦角病菌的检测方法具有用时短、特异性强、灵敏度高、结果准确等优点。

公开(公告)号：CN117551804A

公开(公告)日：2024-02-13

申请号：CN202311516904.5

申请日：2023-11-15

Applicant: 西北农林科技大学 ,  西安黄氏生物工程有限公司

Inventor： 胡小平 ,  黄颖琪 ,  王强 ,  秦君 ,  黄卫利

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明适用于植物病原菌检测方法技术领域，提供了一种检测苹果黑星病菌的引物、试剂盒及其检测方法，检测苹果黑星病菌的RPA引物及CRISPR/Cas12a引物；检测苹果黑星病菌的试剂盒，包含上述引物、Cas12蛋白、T7转录酶、DNA聚合酶以及Cas12/13专用核酸检测试纸条。检测方法包括：利用RPA扩增产物、体外转录合成的指导RNA和FB探针建立CRISPR/Cas12a检测反应体系；反应结束后将Cas12/13专用核酸检测试纸条插入到反应管中，观察试纸条上检测线的变化；若在试纸条的测试条带上出现颜色变化，即为阳性反应，证明含有苹果黑星病菌。本发明特异性强、灵敏度高、结果准确且实用性高。

公开(公告)号：CN118956833A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411281677.7

申请日：2024-09-13

Applicant: 西北农林科技大学 ,  西安黄氏生物工程有限公司

Inventor： 胡小平 ,  王雅娟 ,  秦君 ,  商文静 ,  黄卫利

IPC: C12N9/58 ,  C12N15/57 ,  C12N15/82 ,  A01H5/10 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20 ,  A01N63/50 ,  A01P21/00

Abstract: 本发明提供了一种大丽轮枝菌Verticillium dahliae外泌蛋白激发子VdSP8，并且发现VdSP8能够提高植物抗性和诱导植物防御反应，VdSP8的异源表达显著提高了寄主植物对多种病原菌的抗性，包括大丽轮枝菌Verticillium dahliae、灰葡萄孢菌Botrytis cinerea和丁香假单胞菌Pseudomonas syringae；同时，VdSP8还能提高植物生长速率、增加鲜重和促进植物抽薹。细胞学研究结果显示，VdSP8通过增强胼胝质沉积、促进H2O2积累以及调节超敏反应等途径，提高了植物对黄萎病菌的抗性，对植株喷施VdSP8蛋白或将VdSP8基因导入植物细胞中使其在植物体内表达VdSP8蛋白，可显著提升其对抗黄萎病的抗性，具有很好的农业应用前景。