公开(公告)号：CN119492720A

公开(公告)日：2025-02-21

申请号：CN202510072181.7

申请日：2025-01-17

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 秦君 ,  张慧莹 ,  郭帅领 ,  李群琼 ,  俞皓楠 ,  胡小平

IPC: G01N21/64 ,  C12N15/82 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明涉及生物学技术领域，尤其涉及基于棉花根部表皮细胞检测病原菌效应蛋白定位的方法。所述方法包括以下步骤：构建携带病原菌效应蛋白编码基因和核定位信号的重组载体，将重组载体转入农杆菌菌株中，获得重组农杆菌；将重组农杆菌与病原菌共培养，筛选得到侵染菌株；用侵染菌株侵染棉花幼苗根部表皮，然后培养2～3天；将棉花幼苗根部表皮用DAPI溶液染色，制片后在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光信号，根据绿色荧光信号对效应蛋白进行定位。本发明的方法可快速高效地检测病原菌效应蛋白在棉花根部表皮中的定位，明确效应蛋白为质外体效应蛋白或细胞质效应蛋白，为棉花病原菌效应蛋白功能的研究提供技术支撑。

公开(公告)号：CN118879927A

公开(公告)日：2024-11-01

申请号：CN202411300795.8

申请日：2024-09-18

Applicant: 西北农林科技大学 ,  西安黄氏生物工程有限公司

Inventor： 胡小平 ,  张慧莹 ,  王强 ,  秦君 ,  黄卫利

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明提供了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测麦角病菌的引物，包括RPA上游引物、RPA下游引物和crRNA引物及通用引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.1～4所示；还提供了试剂盒，包括基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测麦角病菌的引物、Cas12a蛋白、T7转录酶、DNA聚合酶、缓冲液、Cas12/13专用核酸检测试纸条；还提供了检测方法：首先提取待测样品DNA，然后用RPA上、下游引物通过RPA扩增技术扩增靶标序列，随后以RPA扩增产物和crRNA、Cas12a蛋白、FB探针建立RPA‑CRISPR/Cas12a检测体系，得到RPA‑CRISPR/Cas12a反应产物，用Cas12/13专用核酸检测试纸条进行检测。本发明基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测麦角病菌的检测方法具有用时短、特异性强、灵敏度高、结果准确等优点。