公开(公告)号：CN113624756A

公开(公告)日：2021-11-09

申请号：CN202111076207.3

申请日：2021-09-14

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 孙丽英 ,  王力 ,  尚巧霞 ,  赵婉莹 ,  张东

IPC: G01N21/78 ,  G01N21/31

Abstract: 本发明提供了一种用于检测植物病毒的试剂盒，包括Buffer 1、Buffer 2、Buffer 3、Buffer 4和Buffer 5，Buffer 1为80％的硝酸钙水溶液，Buffer 2为含I2的质量浓度为5mg/mL的碘液，Buffer 3为含碘的硝酸钙溶液，Buffer 4为0.1mol/L的NaOH水溶液，Buffer 5为1mol/L HCl水溶液。还提供了检测方法，取待测植物叶片加Buffer 1制备淀粉胶体悬浊液，加Buffer 2，离心得到黑色沉淀物，加Buffer 3、离心，加Buffer 4，加热后加Buffer 2、Buffer 5，定容，显色后测560nm的条件下的吸光值，计算淀粉含量，根据RT‑PCR的方法确定5株无毒植物并计算无毒叶片淀粉平均含量，计算带毒叶片与无毒叶片淀粉含量的比值，定性及定量检测。还提供了应用，用于草本和木本植物病毒的检测的检测。本发明能够快速地对植物病毒进行检测，低成本、高通量。

公开(公告)号：CN108624606A

公开(公告)日：2018-10-09

申请号：CN201810257256.9

申请日：2018-03-27

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 成功 ,  昝林森 ,  王力

IPC: C12N15/56 ,  C12N15/62 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明涉及一种密码子优化的重组人溶菌酶基因及其应用，该密码子优化的重组人溶菌酶基因是通过比较牛乳腺优势乳蛋白高频密码子和低频密码子对人溶菌酶密码子进行全局优化(Lyzop)和翻译起始后23位密码子进行优化(Lyzop23)。优化后的密码子显著提高了人溶菌酶mRNA稳定性及在牛乳腺细胞中mRNA表达量。通过蛋白免疫印迹实验证明，密码子优化的重组人溶菌酶基因在牛乳腺细胞中表达量是野生型的2.18倍。为今后细胞生物反应器以及牛乳腺生物反应器高效生产重组人溶菌酶提供了工具基因。同时，将密码子优化的重组人溶菌酶基因与荧光素酶融合表达，通过分析荧光素酶表达量，实现密码子优化效果的快速、准确评价，为今后开展基因密码子优化提供了新的可靠评价方法。

公开(公告)号：CN109554392A

公开(公告)日：2019-04-02

申请号：CN201811547738.4

申请日：2018-12-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张松 ,  昝林森 ,  王力

IPC: C12N15/861 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明公开了一种牛mir-145基因过表达重组腺病毒载体构建方法，以含有牛mir-145基因序列质粒做模板，设计引物并克隆牛mir-145基因；经测序验证后重组到表达载体pSB50上，转化进入感受态细胞，获得表达质粒pSB50-bta-mir-145；经AdMax腺病毒系统包装成重组腺病毒载体pAd-bta-mir-145，其滴度为7.27×1010(PFU/ml)；将重组腺病毒载体加入到HEK293细胞，进行扩增、纯化；用高浓度的重组腺病毒载体pAd-bta-mir-145感染牛前体脂肪细胞，实时荧光定量PCR检测牛mir-145的表达量。其表达水平比对照组高68倍。

公开(公告)号：CN108624606B

公开(公告)日：2021-07-13

申请号：CN201810257256.9

申请日：2018-03-27

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 成功 ,  昝林森 ,  王力

IPC: C12N15/56 ,  C12N15/62 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明涉及一种密码子优化的重组人溶菌酶基因及其应用，该密码子优化的重组人溶菌酶基因是通过比较牛乳腺优势乳蛋白高频密码子和低频密码子对人溶菌酶密码子进行全局优化(Lyzop)和翻译起始后23位密码子进行优化(Lyzop23)。优化后的密码子显著提高了人溶菌酶mRNA稳定性及在牛乳腺细胞中mRNA表达量。通过蛋白免疫印迹实验证明，密码子优化的重组人溶菌酶基因在牛乳腺细胞中表达量是野生型的2.18倍。为今后细胞生物反应器以及牛乳腺生物反应器高效生产重组人溶菌酶提供了工具基因。同时，将密码子优化的重组人溶菌酶基因与荧光素酶融合表达，通过分析荧光素酶表达量，实现密码子优化效果的快速、准确评价，为今后开展基因密码子优化提供了新的可靠评价方法。

公开(公告)号：CN109593785A

公开(公告)日：2019-04-09

申请号：CN201811547742.0

申请日：2018-12-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王力 ,  昝林森 ,  成功 ,  张松

IPC: C12N15/861 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明涉及一种牛丝氨酸苏氨酸激酶STK11干扰腺病毒构建方法，首先筛选干扰效率最高的shRNA序列，然后将该shRNA序列与干扰腺病毒载体重组，构建STK11干扰腺病毒；该STK11干扰腺病毒在秦川牛原代前脂肪细胞中进行侵染和干扰效率验证，结果表明侵染效果良好，STK11的表达在mRNA水平上降低76％，蛋白水平也呈显著性下降，可成功实现STK11基因在体细胞中的持续敲低，为今后开展STK11基因功能的相关研究提供了可靠的实验技术。