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公开(公告)号：CN111569047A
公开(公告)日：2020-08-25
申请号：CN202010412287.4
申请日：2020-05-15
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种蛋白型锰离子螯合剂、免疫抑制剂及应用，属于基因工程领域，包括假结核耶尔森氏菌转锰效应蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；在所述的蛋白上螯合Mn2+。转锰效应蛋白可特异并高效与锰离子结合，且在增强细菌的致病能力方面发挥了重要作用，具体体现在该效应蛋白编码基因缺失突变体菌株降低了假结核耶尔森氏菌对小鼠的致病能力，并且该效应蛋白编码基因缺失突变体菌株更能激活宿主细胞的天然免疫应答；本发明公开的转锰效应蛋白在制备特异性锰离子螯合剂以及免疫抑制剂方面均具有潜在应用前景，同时为增强细菌抗环境胁迫能力提供了新的途径。
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公开(公告)号：CN113755514B
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202111048805.X
申请日：2021-09-08
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌突变体的构建方法及外膜囊泡的制备方法。其包括大肠杆菌外膜囊泡高产突变体的构建和外膜囊泡的提取，所述突变体是通过CRISPR‑Cas9系统同时敲除大肠杆菌Tol‑pal内膜系统蛋白(如SEQ ID NO:1所示)和外膜磷脂积累相关蛋白(如SEQ ID NO:2所示)进行构建。所述外膜囊泡的提取包括：将菌株培养于LB液体培养基，将培养上清过滤除菌、超滤浓缩和超速离心，最终获得外膜囊泡。本发明中双基因的缺失发挥了协同作用，与现有单双基因突变株相比，不仅可显著提高外膜囊泡产量，较原始菌株提高了约180倍，而且所得外膜囊泡具有高纯度、粒径大小适当等特点，是一种低廉、高效的制备方法，解决了外膜囊泡产量不足的问题，展现了其良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113755514A
公开(公告)日：2021-12-07
申请号：CN202111048805.X
申请日：2021-09-08
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌突变体的构建方法及外膜囊泡的制备方法。其包括大肠杆菌外膜囊泡高产突变体的构建和外膜囊泡的提取，所述突变体是通过CRISPR‑Cas9系统同时敲除大肠杆菌Tol‑pal内膜系统蛋白(如SEQ ID NO:1所示)和外膜磷脂积累相关蛋白(如SEQ ID NO:2所示)进行构建。所述外膜囊泡的提取包括：将菌株培养于LB液体培养基，将培养上清过滤除菌、超滤浓缩和超速离心，最终获得外膜囊泡。本发明中双基因的缺失发挥了协同作用，与现有单双基因突变株相比，不仅可显著提高外膜囊泡产量，较原始菌株提高了约180倍，而且所得外膜囊泡具有高纯度、粒径大小适当等特点，是一种低廉、高效的制备方法，解决了外膜囊泡产量不足的问题，展现了其良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN111569047B
公开(公告)日：2023-02-10
申请号：CN202010412287.4
申请日：2020-05-15
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种蛋白型锰离子螯合剂、免疫抑制剂及应用，属于基因工程领域，包括假结核耶尔森氏菌转锰效应蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；在所述的蛋白上螯合Mn2+。转锰效应蛋白可特异并高效与锰离子结合，且在增强细菌的致病能力方面发挥了重要作用，具体体现在该效应蛋白编码基因缺失突变体菌株降低了假结核耶尔森氏菌对小鼠的致病能力，并且该效应蛋白编码基因缺失突变体菌株更能激活宿主细胞的天然免疫应答；本发明公开的转锰效应蛋白在制备特异性锰离子螯合剂以及免疫抑制剂方面均具有潜在应用前景，同时为增强细菌抗环境胁迫能力提供了新的途径。
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