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公开(公告)号：CN106811484B
公开(公告)日：2020-03-10
申请号：CN201710018350.4
申请日：2017-01-11
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/861 , C12N15/66 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种牛PDHB基因腺病毒干扰载体构建及其鉴定方法，序列为：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3。构建方法包括：载体用BamH I，EcoR I双酶切；酶切完成后胶回收；目的片断利用3’和5’的单链退火获得：目的片段与载体连接反应；转化感受态细胞:DH5a；转化后挑菌，摇菌14小时，测序；将重组腺病毒载体质粒PDHB shRNA与pHBAd‑BHG骨架载体共转染HEK293A细胞，获得重组腺病毒Ad‑PDHB shRNA。本发明的shRNA1、shRNA2和shRNA3对PDHB基因的干扰效率分别为：95.12％、12.69％和97.76％。
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公开(公告)号：CN109486752A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201811547543.X
申请日：2018-12-18
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明涉及一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离纯化和鉴定方法，使用II型胶原酶对秦川肉牛背最长肌进行消化，经II型胶原酶消化后的组织块用含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养基中和，经过滤、离心得到细胞，细胞再经洗涤、离心后重悬于含有10％FBS的DMEM/F12培养基中，计数后，将细胞接种在培养皿中，在CO2培养箱中培养1.5小时，用无菌磷酸缓冲盐溶液洗涤除去非粘附细胞，然后将细胞培养在37℃、CO2浓度为5％的培养箱中，每隔2天换一次培养基，待细胞汇合度达到70％-80％后，进行细胞免疫荧光标记阳性细胞鉴定。该方法获得的肉牛肌内脂肪细胞具有较高的前脂肪细胞阳性比率，为提高肌内脂肪沉积的同时不增加皮下及内脏脂肪沉积的研究奠定了基础。
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公开(公告)号：CN109486752B
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN201811547543.X
申请日：2018-12-18
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明涉及一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离纯化和鉴定方法，使用II型胶原酶对秦川肉牛背最长肌进行消化，经II型胶原酶消化后的组织块用含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养基中和，经过滤、离心得到细胞，细胞再经洗涤、离心后重悬于含有10％FBS的DMEM/F12培养基中，计数后，将细胞接种在培养皿中，在CO2培养箱中培养1.5小时，用无菌磷酸缓冲盐溶液洗涤除去非粘附细胞，然后将细胞培养在37℃、CO2浓度为5％的培养箱中，每隔2天换一次培养基，待细胞汇合度达到70％‑80％后，进行细胞免疫荧光标记阳性细胞鉴定。该方法获得的肉牛肌内脂肪细胞具有较高的前脂肪细胞阳性比率，为提高肌内脂肪沉积的同时不增加皮下及内脏脂肪沉积的研究奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
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公开(公告)号：CN113151504A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110539206.1
申请日：2021-05-18
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了一种用于羚牛防盗猎鉴定的引物及其应用，包括Takin‑F和Takin‑R，具体序列为：Takin‑F：5’‑TTCTGCGATTCTGCTTCGTG‑3’；Takin‑R：5’‑CCAGACCCGATGAACACCAG‑3’。对羚牛肌肉组织总RNA的进行转录组测序，根据转录组测序的结果找出了不保守cDNA序列，利用相关生物学分析工具确定了目标cDNA序列，针对此目标cDNA序列设计了特异性引物Takin‑F和Takin‑R，利用特异性引物Takin‑F和Takin‑R鉴定羚牛肌肉组织的提高了鉴定速度和鉴定结果的可靠性；本发明的引物Takin‑F和Takin‑R用于鉴定羚牛肌肉组织特异性时采取荧光定量PCR法，提高了鉴定的灵敏性、特异性和精确性，同时提高了鉴定速度，鉴定结果的观测重复性好、直观性好且可靠性高。
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公开(公告)号：CN113151504B
公开(公告)日：2022-06-24
申请号：CN202110539206.1
申请日：2021-05-18
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了一种用于羚牛防盗猎鉴定的引物及其应用，包括Takin‑F和Takin‑R，具体序列为：Takin‑F：5’‑TTCTGCGATTCTGCTTCGTG‑3’；Takin‑R：5’‑CCAGACCCGATGAACACCAG‑3’。本发明的引物Takin‑F和Takin‑R用于鉴定羚牛肌肉组织特异性时采取荧光定量PCR法，提高了鉴定的灵敏性、特异性、精确性和鉴定速度。
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公开(公告)号：CN107236750A
公开(公告)日：2017-10-10
申请号：CN201710313644.X
申请日：2017-05-05
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/66 , C12N15/861
CPC classification number: C12N15/66 , C12N15/86 , C12N2710/10343
Abstract: 本发明属于重组腺病毒载体技术领域，公开了一种牛PDHB基因过表达重组腺病毒载体构建及包装方法，所述牛PDHB基因过表达重组腺病毒载体的序列为GenBank:AY370909.2。本发明克隆获得的牛PDHB基因CDS与数据库GenBank收录的序列一致，将PDHB基因CDS与穿梭载体pAdTrack‑CMV重组并转染HEK 293A细胞后成功获得了重组腺病毒Ad‑PDHB，其滴度为1.66×109PFU·mL‑1；腺病毒Ad‑PDHB侵染牛肌内前体脂肪细胞后，PDHB在mRNA的表达水平比对照组高25.5倍。
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公开(公告)号：CN106811484A
公开(公告)日：2017-06-09
申请号：CN201710018350.4
申请日：2017-01-11
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/861 , C12N15/66 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种牛PDHB基因腺病毒干扰载体构建及其鉴定方法，序列为：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3。构建方法包括：载体用BamH I，EcoR I双酶切；酶切完成后胶回收；目的片断利用3’和5’的单链退火获得：目的片段与载体连接反应；转化感受态细胞:DH5a；转化后挑菌，摇菌14小时，测序；将重组腺病毒载体质粒PDHB shRNA与pHBAd‑BHG骨架载体共转染HEK293A细胞，获得重组腺病毒Ad‑PDHB shRNA。本发明的shRNA1、shRNA2和shRNA3对PDHB基因的干扰效率分别为：95.12％、12.69％和97.76％。
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