公开(公告)号：CN109486752B

公开(公告)日：2022-05-27

申请号：CN201811547543.X

申请日：2018-12-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王晓宇 ,  昝林森 ,  李安宁 ,  张愈 ,  杨武才

IPC: C12N5/077 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明涉及一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离纯化和鉴定方法，使用II型胶原酶对秦川肉牛背最长肌进行消化，经II型胶原酶消化后的组织块用含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养基中和，经过滤、离心得到细胞，细胞再经洗涤、离心后重悬于含有10％FBS的DMEM/F12培养基中，计数后，将细胞接种在培养皿中，在CO2培养箱中培养1.5小时，用无菌磷酸缓冲盐溶液洗涤除去非粘附细胞，然后将细胞培养在37℃、CO2浓度为5％的培养箱中，每隔2天换一次培养基，待细胞汇合度达到70％‑80％后，进行细胞免疫荧光标记阳性细胞鉴定。该方法获得的肉牛肌内脂肪细胞具有较高的前脂肪细胞阳性比率，为提高肌内脂肪沉积的同时不增加皮下及内脏脂肪沉积的研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN109486752A

公开(公告)日：2019-03-19

申请号：CN201811547543.X

申请日：2018-12-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王晓宇 ,  昝林森 ,  李安宁 ,  张愈 ,  杨武才

IPC: C12N5/077 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明涉及一种秦川肉牛肌内脂肪细胞的分离纯化和鉴定方法，使用II型胶原酶对秦川肉牛背最长肌进行消化，经II型胶原酶消化后的组织块用含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养基中和，经过滤、离心得到细胞，细胞再经洗涤、离心后重悬于含有10％FBS的DMEM/F12培养基中，计数后，将细胞接种在培养皿中，在CO2培养箱中培养1.5小时，用无菌磷酸缓冲盐溶液洗涤除去非粘附细胞，然后将细胞培养在37℃、CO2浓度为5％的培养箱中，每隔2天换一次培养基，待细胞汇合度达到70％-80％后，进行细胞免疫荧光标记阳性细胞鉴定。该方法获得的肉牛肌内脂肪细胞具有较高的前脂肪细胞阳性比率，为提高肌内脂肪沉积的同时不增加皮下及内脏脂肪沉积的研究奠定了基础。