修饰宿主DNA中的对象区域的方法和选择性标记盒

    公开(公告)号:CN101978057B

    公开(公告)日:2012-09-05

    申请号:CN200980110388.8

    申请日:2009-03-23

    CPC classification number: C12N15/1082 C12N15/102

    Abstract: 本发明涉及使用供体DNA修饰宿主DNA中的对象区域的方法:其中所述供体DNA依序包括分别与宿主DNA中的对象区域外侧的5′-侧区、宿主DNA中的对象区域外侧的3′-侧区和宿主DNA中的对象区域内侧的第一同源重组区同源的区域,并且在与3′-侧区同源的区域和与第一同源重组区同源的区域之间还包括第一选择性标记基因、表达诱导启动子和在表达诱导启动子的控制下表达的第二选择性标记基因;该方法包括以下步骤:第一步骤,在5′-侧区和第一同源重组区的区域处进行供体DNA和宿主DNA之间的同源重组,从而基于第一选择性标记基因的表达选择与供体DNA整合的宿主;以及第二步骤,在通过第一步骤与供体DNA整合的宿主DNA内,在源自宿主DNA的3′-侧区和源自供体DNA的3′-侧区这两个区域之间进行同源重组,从而在表达诱导启动子的表达诱导条件下基于第二选择性标记基因的表达选择其对象区域被修饰的宿主。本发明还涉及本方法中使用的选择性标记盒。

    修饰宿主DNA中的对象区域的方法和选择性标记盒

    公开(公告)号:CN101978057A

    公开(公告)日:2011-02-16

    申请号:CN200980110388.8

    申请日:2009-03-23

    CPC classification number: C12N15/1082 C12N15/102

    Abstract: 本发明涉及使用供体DNA修饰宿主DNA中的对象区域的方法:其中所述供体DNA依序包括分别与宿主DNA中的对象区域外侧的5′-侧区、宿主DNA中的对象区域外侧的3′-侧区和宿主DNA中的对象区域内侧的第一同源重组区同源的区域,并且在与3′-侧区同源的区域和与第一同源重组区同源的区域之间还包括第一选择性标记基因、表达诱导启动子和在表达诱导启动子的控制下表达的第二选择性标记基因;该方法包括以下步骤:第一步骤,在5′-侧区和第一同源重组区的区域处进行供体DNA和宿主DNA之间的同源重组,从而基于第一选择性标记基因的表达选择与供体DNA整合的宿主;以及第二步骤,在通过第一步骤与供体DNA整合的宿主DNA内,在源自宿主DNA的3′-侧区和源自供体DNA的3′-侧区这两个区域之间进行同源重组,从而在表达诱导启动子的表达诱导条件下基于第二选择性标记基因的表达选择其对象区域被修饰的宿主。本发明还涉及本方法中使用的选择性标记盒。

    重组微生物
    5.
    发明授权

    公开(公告)号:CN100519753C

    公开(公告)日:2009-07-29

    申请号:CN200480031689.9

    申请日:2004-11-05

    CPC classification number: C12N15/75 C12P21/00

    Abstract: 一种重组微生物,其通过将编码蛋白质或多肽的基因转移到能够以提高的生产率生产蛋白质或多肽的宿主微生物上而获得,以及使用该重组微生物生产蛋白质或多肽的方法。该重组微生物通过将编码异性蛋白质或多肽的基因转移到枯草杆菌基因comA、yopO、treR、yubA、cspB、yvaN、yttP、yurK、yozA、licR、sigL、mntR、glcT、yvdE、ykvE、slr、rocR、ccpA、yaaT、yyaA、yycH、yacP、hprK、rsiX、yhdK以及ylbO的任意一种或一个或多个与这些基因的任意一种功能相当的基因缺失或被剔除的微生物的突变株上而制备。

    重组微生物
    6.
    发明公开

    公开(公告)号:CN1875106A

    公开(公告)日:2006-12-06

    申请号:CN200480031689.9

    申请日:2004-11-05

    CPC classification number: C12N15/75 C12P21/00

    Abstract: 一种重组微生物,其通过将编码蛋白质或多肽的基因转移到能够以提高的生产率生产蛋白质或多肽的宿主微生物上而获得,以及使用该重组微生物生产蛋白质或多肽的方法。该重组微生物通过将编码异性蛋白质或多肽的基因转移到枯草杆菌基因comA、yopO、treR、yvbA、cspB、yvaN、yttP、yurK、yozA、licR、sigL、mntR、glcT、yvdE、ykvE、slr、rocR、ccpA、yaaT、yyaA、yycH、yacP、hprK、rsiX、yhdK以及ylbO的任意一种或一个或多个与这些基因的任意一种功能相当的基因缺失或被剔除的微生物的突变株上而制备。

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