公开(公告)号：CN104109704B

公开(公告)日：2016-05-04

申请号：CN201410324737.9

申请日：2014-07-09

Applicant: 福州大学 ,  福州大北农生物技术有限公司

Inventor： 吕暾 ,  王立波 ,  乔春晓 ,  王伟东 ,  庄星来 ,  洪晶 ,  林拱阳 ,  陈晟生

IPC: C12P21/02 ,  C07K14/01 ,  C07K1/22 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种重组猪圆环病毒衣壳蛋白包涵体的分离纯化方法。本发明在诱导产生包涵体后，通过优化的裂解方法破碎菌体，初步去除了一部分杂质，接着通过对包涵体进行一系列处理，使得包涵体形成可溶性目标蛋白，避免了使用尿素、盐酸胍等变性剂对包涵体的变性溶解和复性。而镍柱亲和层析使得可以纯化获得的蛋白量比较大，具有纯度高，操作简单等优点。本发明从不溶性包涵体中分离纯化出来可溶性的目的蛋白，避免了反复变性复性的繁琐步骤以及复性过程中的蛋白沉淀的危险，并且所获得的蛋白纯度可以达到电泳纯。

公开(公告)号：CN104109704A

公开(公告)日：2014-10-22

申请号：CN201410324737.9

申请日：2014-07-09

Applicant: 福州大学 ,  福州大北农生物技术有限公司

Inventor： 吕暾 ,  王立波 ,  乔春晓 ,  王伟东 ,  庄星来 ,  洪晶 ,  林拱阳 ,  陈晟生

IPC: C12P21/02 ,  C07K14/01 ,  C07K1/22 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种重组猪圆环病毒衣壳蛋白包涵体的分离纯化方法。本发明在诱导产生包涵体后，通过优化的裂解方法破碎菌体，初步去除了一部分杂质，接着通过对包涵体进行一系列处理，使得包涵体形成可溶性目标蛋白，避免了使用尿素、盐酸胍等变性剂对包涵体的变性溶解和复性。而镍柱亲和层析使得可以纯化获得的蛋白量比较大，具有纯度高，操作简单等优点。本发明从不溶性包涵体中分离纯化出来可溶性的目的蛋白，避免了反复变性复性的繁琐步骤以及复性过程中的蛋白沉淀的危险，并且所获得的蛋白纯度可以达到电泳纯。

公开(公告)号：CN104846111B

公开(公告)日：2017-09-15

申请号：CN201510298348.8

申请日：2015-06-03

Applicant: 福州大学

Inventor： 吕暾 ,  乔春晓 ,  王立波 ,  谢思卿

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及用于筛选枯草芽孢杆菌荧光定量PCR内参基因引物，所述的引物序列为clsA F:GGGTCCAGAACGCTGAGAA，clsA R:AAAGCCTCCGACATAACCG；dnaN F:GCACTTGCCGCAGATTGA，dnaN R:AATGCAAGACGGTGGCTATC；rpoB F:TGTCCGCATTGATCGCAC，rpoB R:TCAAGCGTATTTCGCAGGTA。本发明中的3对内参基因引物序列特异性扩增高，扩增效率接近，线性相关性好，可用于检测枯草芽胞杆菌168菌株中基因的表达量变化。

公开(公告)号：CN104846111A

公开(公告)日：2015-08-19

申请号：CN201510298348.8

申请日：2015-06-03

Applicant: 福州大学

Inventor： 吕暾 ,  乔春晓 ,  王立波 ,  谢思卿

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6851 ,  C12Q2561/113 ,  C12Q2563/107 ,  C12Q2545/101

Abstract: 本发明涉及用于筛选枯草芽孢杆菌荧光定量PCR内参基因引物，所述的引物序列为clsA F: GGGTCCAGAACGCTGAGAA，clsA R: AAAGCCTCCGACATAACCG； dnaN F: GCACTTGCCGCAGATTGA，dnaN R: AATGCAAGACGGTGGCTATC； rpoB F: TGTCCGCATTGATCGCAC，rpoB R: TCAAGCGTATTTCGCAGGTA。本发明中的3对内参基因引物序列特异性扩增高，扩增效率接近，线性相关性好，可用于检测枯草芽胞杆菌168菌株中基因的表达量变化。

公开(公告)号：CN103834670B

公开(公告)日：2016-01-06

申请号：CN201410061725.1

申请日：2014-02-24

Applicant: 福州大北农生物技术有限公司 ,  福州大学

Inventor： 吕暾 ,  陈灵艳 ,  陈晟生 ,  林拱阳 ,  乔春晓 ,  俞建萍 ,  包松英

IPC: C12N15/34 ,  C12N15/75 ,  C12R1/93 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了优化的猪圆环病毒ORF2截短基因，所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO．1。所述基因在枯草芽孢杆菌中表达。所述枯草芽孢杆菌为BS168或WB800。本发明采用以上技术方案，通过将去除NLS片段并根据密码子偏好性优化后的截短基因，能够成功的在枯草芽孢杆菌中得到表达。

公开(公告)号：CN103834670A

公开(公告)日：2014-06-04

申请号：CN201410061725.1

申请日：2014-02-24

Applicant: 福州大北农生物技术有限公司 ,  福州大学

Inventor： 吕暾 ,  陈灵艳 ,  陈晟生 ,  林拱阳 ,  乔春晓 ,  俞建萍 ,  包松英

IPC: C12N15/34 ,  C12N15/75 ,  C12R1/93 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了优化的猪圆环病毒ORF2截短基因，所述基因的核苷酸序列为SEQIDNO．1。所述基因在枯草芽孢杆菌中表达。所述枯草芽孢杆菌为BS168或WB800。本发明采用以上技术方案，通过将去除NLS片段并根据密码子偏好性优化后的截短基因，能够成功的在枯草芽孢杆菌中得到表达。