公开(公告)号：CN101550413B

公开(公告)日：2011-02-09

申请号：CN200910043400.X

申请日：2009-05-14

Applicant: 湖南大学

Inventor： 曾光明 ,  范长征 ,  杨春平 ,  汤琳 ,  李贞 ,  李凤 ,  肖勇

IPC: C12N15/10 ,  C07H21/04

Abstract: 本发明公开了一种堆肥微生物总DNA的提取与纯化方法及其缓冲液，包括以下步骤：向待提取DNA的堆肥样品中以8～15ml/g堆肥的用量添加去腐缓冲液进行脱腐；然后以1.0～1.5ml/g堆肥的用量加入DNA提取缓冲液进行微生物总DNA的粗提；最后用试剂盒对上述粗提的DNA溶液进行纯化，得到堆肥微生物总DNA。本发明的方法能够减少腐殖酸的影响，并有效提高堆肥中提取的DNA的产量和纯度，以便更好地服务于堆肥微生物分子生态学和其它功能基因的研究。

公开(公告)号：CN101550413A

公开(公告)日：2009-10-07

申请号：CN200910043400.X

申请日：2009-05-14

Applicant: 湖南大学

Inventor： 曾光明 ,  范长征 ,  杨春平 ,  汤琳 ,  李贞 ,  李凤 ,  肖勇

IPC: C12N15/10 ,  C07H21/04

Abstract: 本发明公开了一种堆肥微生物总DNA的提取与纯化方法及其缓冲液，包括以下步骤：向待提取DNA的堆肥样品中以8～15ml/g堆肥的用量添加去腐缓冲液进行脱腐；然后以1.0～1.5ml/g堆肥的用量加入DNA提取缓冲液进行微生物总DNA的粗提；最后用试剂盒对上述粗提的DNA溶液进行纯化，得到堆肥微生物总DNA。本发明的方法能够减少腐殖酸的影响，并有效提高堆肥中提取的DNA的产量和纯度，以便更好地服务于堆肥微生物分子生态学和其它功能基因的研究。

公开(公告)号：CN101550449B

公开(公告)日：2011-11-30

申请号：CN200910043399.0

申请日：2009-05-14

Applicant: 湖南大学

Inventor： 范长征 ,  曾光明 ,  杨春平 ,  梁婕 ,  杨朝晖 ,  李凤 ,  李贞 ,  肖勇

IPC: C12Q1/68 ,  G01N27/447 ,  G01N21/78

Abstract: 本发明公开了一种堆肥中生物酶基因多样性的分析方法，包括以下步骤：首先提取堆肥中的微生物总DNA，该提取过程又包括样品的脱腐、DNA的粗提和DNA的纯化三个步骤；然后利用PCR扩增程序对特定生物酶基因进行扩增；再在1×TAE缓冲液中，60℃恒温、100V恒压条件下运行变性梯度凝胶电泳12～14h；最后对变性梯度凝胶电泳图谱进行分析，确定所述堆肥中特定生物酶基因的多样性。本发明的分析方法具有高通量、低成本、简便直观等优点，以便于更好地表征堆肥中具有降解功能的微生物种群。

公开(公告)号：CN101550449A

公开(公告)日：2009-10-07

申请号：CN200910043399.0

申请日：2009-05-14

Applicant: 湖南大学

Inventor： 范长征 ,  曾光明 ,  杨春平 ,  梁婕 ,  杨朝晖 ,  李凤 ,  李贞 ,  肖勇

IPC: C12Q1/68 ,  G01N27/447 ,  G01N21/78

Abstract: 本发明公开了一种堆肥中生物酶基因多样性的分析方法，包括以下步骤：首先提取堆肥中的微生物总DNA，该提取过程又包括样品的脱腐、DNA的粗提和DNA的纯化三个步骤；然后利用PCR扩增程序对特定生物酶基因进行扩增；再在1×TAE缓冲液中，60℃恒温、100V恒压条件下运行变性梯度凝胶电泳12～14h；最后对变性梯度凝胶电泳图谱进行分析，确定所述堆肥中特定生物酶基因的多样性。本发明的分析方法具有高通量、低成本、简便直观等优点，以便于更好地表征堆肥中具有降解功能的微生物种群。