一种T7 RNA聚合酶的制备方法及其在体外合成dsRNA中的应用

    公开(公告)号:CN117305338A

    公开(公告)日:2023-12-29

    申请号:CN202311292927.2

    申请日:2023-10-08

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明属于生物防治技术领域,尤其涉及一种T7RNA聚合酶的制备方法及其应用。制备方法包括:S11、构建sfGFP和T7RNA聚合酶融合表达的表达载体,sfGFP位于T7RNA聚合酶的上游;S12、将表达载体转入宿主菌中,培养转化子并诱导融合蛋白表达;S13、收集转化子,加入TES缓冲液混匀并静置,之后4000‑8000rpm离心3‑10min,收集上清液,得到含T7RNA聚合酶的溶液。本发明通过sfGFP与T7RNA聚合酶融合表达,可将部分T7RNA聚合酶定位在宿主菌外膜上,通过TES缓冲液洗脱即可得到较纯且具有活性的T7RNA聚合酶,极大简化了酶的制备过程,显著降低了成本。

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