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公开(公告)号:CN112899294B
公开(公告)日:2022-07-22
申请号:CN202110155858.5
申请日:2021-02-04
申请人: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号: C12N15/56 , C12N15/62 , C12N9/42 , C12N9/46 , C07K19/00 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N1/21 , A23L33/17 , A23L33/135 , A23K20/189 , A23K10/18 , A61K48/00 , A61K38/47 , A61P1/00
摘要: 本发明通过把中华竹鼠肠道微生物宏转录组拼接后的核酸序列与糖苷水解酶家族比对,筛选有较高同源性的序列,去除其原有的信号肽并添加猪腮腺分泌蛋白信号肽,通过猪密码子优化后连接到pcd3.1载体上。转染到猪肾上皮细胞进行表达验证,收集其细胞培养液进行酶活分析,比较其酶活力,选择最优的HG27基因,检测其最适pH、蛋白耐受和不同底物的酶促反应。从而,获得了一种多功能酶基因HG27,其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备,食品和药品行业等领域应用,以解决纤维素难降解吸收和排泄物污染环境的问题。
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公开(公告)号:CN112899294A
公开(公告)日:2021-06-04
申请号:CN202110155858.5
申请日:2021-02-04
申请人: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号: C12N15/56 , C12N15/62 , C12N9/42 , C12N9/46 , C07K19/00 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N1/21 , A23L33/17 , A23L33/135 , A23K20/189 , A23K10/18 , A61K48/00 , A61K38/47 , A61P1/00
摘要: 本发明通过把中华竹鼠肠道微生物宏转录组拼接后的核酸序列与糖苷水解酶家族比对,筛选有较高同源性的序列,去除其原有的信号肽并添加猪腮腺分泌蛋白信号肽,通过猪密码子优化后连接到pcd3.1载体上。转染到猪肾上皮细胞进行表达验证,收集其细胞培养液进行酶活分析,比较其酶活力,选择最优的HG27基因,检测其最适pH、蛋白耐受和不同底物的酶促反应。从而,获得了一种多功能酶基因HG27,其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备,食品和药品行业等领域应用,以解决纤维素难降解吸收和排泄物污染环境的问题。
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公开(公告)号:CN113088529B
公开(公告)日:2022-08-02
申请号:CN202110638095.X
申请日:2021-06-08
申请人: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号: C12N15/56 , C12N9/42 , C12N15/85 , A23L33/00 , A23K20/189 , A01K67/027
摘要: 本发明通过高膳食纤维饲料诱导,取竹鼠盲肠、结肠食糜,分离其微生物总RNA,通过宏转录组学分析筛选糖苷水解酶基因,获得有表达β‑葡聚糖酶功能的新型β‑葡聚糖酶基因HG278,该基因编码的β‑葡聚糖酶在pH3.0~8.0酶活力呈锯齿形变化,对胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶具有较高的耐受力,非常适合在猪胃肠道中发挥功能,是一种良好的饲料和食品,亦可用于制备用于改善胃肠道内环境、药品、食品、保健品等用途的酶制剂,具有较广泛的用途。
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公开(公告)号:CN112852845B
公开(公告)日:2022-07-15
申请号:CN202110156059.X
申请日:2021-02-04
申请人: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号: C12N15/56 , C12N9/42 , C12N15/85 , A23K20/189 , A23K50/75 , A01K67/027
摘要: 本发明公开了一种新型多功能酶基因HG32及应用,该酶来源于中华竹鼠肠道微生物,能够兼容真核生物细胞表达系统,表达高生物活性的纤维素酶,其可在畜禽饲料酶制剂、转基因动物制备、食品和药品行业等领域应用,以解决植物纤维素难降解、饲料营养利用率低等问题,减轻动物排泄物中氮和、有机物等污染问题。本发明通过对竹鼠肠道微生物宏转录组测序,序列拼接,与NCBI上已有的糖苷水解酶家族进行同源性对比,筛选高表达的、同源性高于50%的疑似纤维素酶的基因,预测其信号肽,并用猪腮腺分泌蛋白信号肽替换原有的信号肽,按猪密码子偏好优化后克隆到真核表达载体上,通过脂质体转染到猪肾上皮细胞中表达,收集细胞培养上清液进行酶活分析比较后获得。
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公开(公告)号:CN110846297B
公开(公告)日:2023-04-07
申请号:CN201911170441.5
申请日:2019-11-26
申请人: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
摘要: 本发明公开了一种多功能融合酶和多功能融合酶真核表达载体及其构建方法,该多功能融合酶可以表达木聚糖酶、植酸酶、果胶酶,葡聚糖酶和纤维素酶,将其用于后期制备相应的转基因动物,该动物将自身分泌这些酶,起到消化饲料中木聚糖、植酸、果胶、葡聚糖酶和纤维素等抗营养因子,达到提高饲料利用率,减少污染排放的功效。同时,解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题;解决2A连接肽多基因共表达效率低的问题,及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题,达到多基因高效共表达的目的。
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公开(公告)号:CN111154003B
公开(公告)日:2022-11-04
申请号:CN202010038439.9
申请日:2020-01-14
申请人: 温氏食品集团股份有限公司
摘要: 本发明公开了一种可以提高基因敲入效率的Cas9融合蛋白和一种安全高效的外源基因敲入整合系统。本发明通过将Cas9蛋白和转录因子的DNA结合域融合制得Cas9融合蛋白用于基因敲入,可以有效提高基因的敲入效率。外源基因敲入整合系统在应用上述Cas9融合蛋白的基础上进一步利用小分子化合物对共转染了表达Cas9融合蛋白和gRNA的表达载体和供体载体的细胞进行干预,可以利用Cas9融合蛋白和小分子化合物的协同作用,有效促进不同基因组及细胞系的KI事件的发生,显著提高基因的敲入效率,为模式动物的生产以及基因治疗提供便利。
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公开(公告)号:CN113088529A
公开(公告)日:2021-07-09
申请号:CN202110638095.X
申请日:2021-06-08
申请人: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号: C12N15/56 , C12N9/42 , C12N15/85 , A23L33/00 , A23K20/189 , A01K67/027
摘要: 本发明通过高膳食纤维饲料诱导,取竹鼠盲肠、结肠食糜,分离其微生物总RNA,通过宏转录组学分析筛选糖苷水解酶基因,获得有表达β‑葡聚糖酶功能的新型β‑葡聚糖酶基因HG278,该基因编码的β‑葡聚糖酶在pH3.0~8.0酶活力呈锯齿形变化,对胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶具有较高的耐受力,非常适合在猪胃肠道中发挥功能,是一种良好的饲料和食品,亦可用于制备用于改善胃肠道内环境、药品、食品、保健品等用途的酶制剂,具有较广泛的用途。
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公开(公告)号:CN110527698A
公开(公告)日:2019-12-03
申请号:CN201910782047.0
申请日:2019-08-23
申请人: 温氏食品集团股份有限公司
摘要: 本发明涉及基因工程技术领域,特别涉及一种利用小分子化合物提高基因组定点插入效率的方法。该方法通过小分子化合物与CRISPR/Cas9系统共同作用于细胞来实现。具体地为,是在CRISPR/Cas9系统包含目的基因gRNA片段,可以定点识别目的基因,并使目的基因发生双链断裂,而在断裂处,小分子化合物发挥作用,进行同源重组修复,高效的完成基因组定点插入,经小分子化合物处理的细胞基因组定点插入效率显著提高。
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公开(公告)号:CN110846297A
公开(公告)日:2020-02-28
申请号:CN201911170441.5
申请日:2019-11-26
申请人: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
摘要: 本发明公开了一种多功能融合酶和多功能融合酶真核表达载体及其构建方法,该多功能融合酶可以表达木聚糖酶、植酸酶、果胶酶,葡聚糖酶和纤维素酶,将其用于后期制备相应的转基因动物,该动物将自身分泌这些酶,起到消化饲料中木聚糖、植酸、果胶、葡聚糖酶和纤维素等抗营养因子,达到提高饲料利用率,减少污染排放的功效。同时,解决刚性肽介导两个以上融合蛋白共表达时相互干扰问题;解决2A连接肽多基因共表达效率低的问题,及多基因共表达中2A多肽残基对上游酶蛋白干扰的问题,达到多基因高效共表达的目的。
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公开(公告)号:CN110846337B
公开(公告)日:2023-02-28
申请号:CN201911170226.5
申请日:2019-11-26
申请人: 温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号: C12N15/62 , C12N15/873 , A01K67/027
摘要: 本发明公开了一种多功能融合酶XABT基因及构建方法和应用,该多功能融合酶XABT基因,可以同时表达表达木聚糖酶、植酸酶、葡聚糖酶和纤维素酶,并具有高效的酶活,该多功能融合酶强化了葡聚糖酶活性,对含葡聚糖较高的大麦、燕麦、黑麦、小麦及其麸皮类日粮具有更强的消化能力。亦可以用于制备节粮环保转基因经济动物,消除饲料中主要抗营养因子,达到提高饲料消化率,减少污染排放的目的。
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