公开(公告)号：CN102936619B

公开(公告)日：2014-10-22

申请号：CN201210202181.7

申请日：2012-06-15

Applicant: 清华大学

Inventor： 何苗 ,  林怡雯 ,  李丹 ,  吴舒旭

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/10 ,  C12Q1/06 ,  C12N15/11 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种定量检测大肠杆菌RNA的方法及其专用标准品和应用。本发明提供的方法包括如下步骤：（1）按照如下方法制作标准曲线；将RNA标准品配制成各个浓度的标准品稀释液，然后将各个标准品稀释液反转录为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，以实时荧光定量PCR体系中的cDNA对应的RNA拷贝数（也可对拷贝数进行数据处理，如拷贝数以10为底的对数）和Ct值制作标准曲线方程；（2）提取大肠杆菌的总RNA并反转录为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，将Ct值代入所述标准曲线方程，得到大肠杆菌的RNA含量。本发明的方法可用于快速检测环境中少量的大肠杆菌，为快速检测活性大肠杆菌提供技术支持。

公开(公告)号：CN102967545A

公开(公告)日：2013-03-13

申请号：CN201210438843.0

申请日：2012-11-06

Applicant: 清华大学

Inventor： 何苗 ,  李丹 ,  林怡雯 ,  杨天

IPC: G01N15/14

Abstract: 本发明公开了一种检测活性细菌含量的方法，特别涉及一种通过联合使用CTC染料染色和流式细胞仪来检测活性细菌含量的方法（简称CTC-流式细胞仪法或CTC-FCM法）。本发明提供的第一种检测活性细菌含量的方法，是将CTC染料与待测液体样本共孵育，然后通过流式细胞仪检测所述待测液体样本中的活性细菌含量。本发明中采用灵敏的检测仪器（流式细胞仪）检测微弱标记的细胞以及确定最佳实验条件，可以大大提高所测定的活性细菌的准确度，以达到准确、快速检测活性病原菌的目的。本发明所采用的方法快速、简便，具有广谱识别性，能够准确、快速检测到活性病原菌，可以用于环境样品中活性病原菌的检测。

公开(公告)号：CN102936619A

公开(公告)日：2013-02-20

申请号：CN201210202181.7

申请日：2012-06-15

Applicant: 清华大学

Inventor： 何苗 ,  林怡雯 ,  李丹 ,  吴舒旭

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/10 ,  C12Q1/06 ,  C12N15/11 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种定量检测大肠杆菌RNA的方法及其专用标准品和应用。本发明提供的方法包括如下步骤：（1）按照如下方法制作标准曲线；将RNA标准品配制成各个浓度的标准品稀释液，然后将各个标准品稀释液反转录为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，以实时荧光定量PCR体系中的cDNA对应的RNA拷贝数（也可对拷贝数进行数据处理，如拷贝数以10为底的对数）和Ct值制作标准曲线方程；（2）提取大肠杆菌的总RNA并反转录为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光定量PCR，将Ct值代入所述标准曲线方程，得到大肠杆菌的RNA含量。本发明的方法可用于快速检测环境中少量的大肠杆菌，为快速检测活性大肠杆菌提供技术支持。

公开(公告)号：CN103088139B

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201310031783.5

申请日：2013-01-28

Applicant: 清华大学

Inventor： 李丹 ,  林怡雯 ,  何苗

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/32

Abstract: 本发明公开了一种用于检测分枝杆菌的引物对和标准品以及它们的应用。本发明提供的引物对由序列2所示的DNA和序列3所示DNA组成。本发明还提供了一种标准品，为序列表的序列1所示的双链DNA分子或含有序列表的序列1所示的双链DNA分子的质粒。本发明提供了针对分枝杆菌特异性良好的特异引物对，并提供了对于分枝杆菌菌株具有通用性的标准品，可以辅助鉴定分枝杆菌，也可以借助荧光定量检测待测液体样本或待测固体样本溶液中的分枝杆菌含量，具有灵敏度高、特异性好、检测快速等优点、且可以检测到无法培养的细菌，从而检测结果更为准确。本发明为饮用水安全、再生水安全等提供了技术支持。

公开(公告)号：CN103088139A

公开(公告)日：2013-05-08

申请号：CN201310031783.5

申请日：2013-01-28

Applicant: 清华大学

Inventor： 李丹 ,  林怡雯 ,  何苗

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/32

Abstract: 本发明公开了一种用于检测分枝杆菌的引物对和标准品以及它们的应用。本发明提供的引物对由序列2所示的DNA和序列3所示DNA组成。本发明还提供了一种标准品，为序列表的序列1所示的双链DNA分子或含有序列表的序列1所示的双链DNA分子的质粒。本发明提供了针对分枝杆菌特异性良好的特异引物对，并提供了对于分枝杆菌菌株具有通用性的标准品，可以辅助鉴定分枝杆菌，也可以借助荧光定量检测待测液体样本或待测固体样本溶液中的分枝杆菌含量，具有灵敏度高、特异性好、检测快速等优点、且可以检测到无法培养的细菌，从而检测结果更为准确。本发明为饮用水安全、再生水安全等提供了技术支持。