公开(公告)号：CN115124609A

公开(公告)日：2022-09-30

申请号：CN202110331296.5

申请日：2021-03-29

Applicant: 深圳北京大学香港科技大学医学中心

Inventor： 刘伟 ,  陈伟荻 ,  刘宇扬 ,  刘佳 ,  陈倩苟 ,  蒋日婷

IPC: C07K14/435 ,  C07K1/14 ,  C07K1/16 ,  C07K1/22

Abstract: 本发明公开了一种改进的纯化可溶性果蝇TRP离子通道蛋白的方法。本发明方法是通过培养w[1118]品系的野生型果蝇，借由分离得到的果蝇头部，在含有十二烷基‑β‑D‑麦芽糖苷（N‑Dodecyl‑β‑D‑maltoside,DDM）去垢剂的缓冲液中，以6xNORPA863‑1095蛋白为诱饵，对INAD蛋白复合物进行亲和纯化，然后用PGEX‑4T‑1载体表达GST‑TRP‑CT 1260‑1275蛋白进行竞争性洗脱，得到可溶性的TRP离子通道蛋白，最后使用凝胶层析得到电泳单一条带的果蝇TRP离子通道蛋白。使用本方法将使得果蝇TRP蛋白可以通过野生型果蝇直接表达，大大降低了使用昆虫细胞纯化蛋白的生产成本和生产难度。