公开(公告)号：CN115046973A

公开(公告)日：2022-09-13

申请号：CN202210657900.8

申请日：2022-06-12

Applicant: 浙江大学

Inventor： 华跃进 ,  钟世通 ,  陆慧智 ,  宋爽 ,  王梁燕

IPC: G01N21/64 ,  C07K19/00 ,  C12N9/50

Abstract: 本发明公开了一种基于FRET的DNA损伤检测方法及功能蛋白。利用耐辐射奇球菌中的阻遏蛋白DdrO，将黄色荧光蛋白eYFP和青色荧光蛋白eCFP分别连接于其N端和C端，构建出具有荧光能量转移特性的功能蛋白YDC；同时利用能特异性切割DdrO的耐辐射奇球菌损伤响应调控因子PprI蛋白，将PprI蛋白的91号位点的天冬氨酸（D）突变为丙氨酸（A）后得到蛋白PprI‑D91A，以降低其不存在单链DNA时的酶切活性；当体系中存在损伤产生的单链DNA时，PprI‑D91A能够快速地酶切YDC，在440 nm激发光的作用下，YDC发射光的480 nm峰升高且530 nm峰下降；同时还提供了YDC和PprI‑D91A的氨基酸序列以及检测DNA损伤的反应体系。本发明对开发新型分子生物学的工具具有重要指导意义。

公开(公告)号：CN119746072A

公开(公告)日：2025-04-04

申请号：CN202411871650.3

申请日：2024-12-18

Applicant: 浙江大学

Inventor： 华跃进 ,  宋爽 ,  王梁燕 ,  钟世通 ,  陆慧智

IPC: A61K45/00 ,  A61K35/76 ,  A61K45/06 ,  A61K31/7088 ,  A61P31/04

Abstract: 本发明公开了莫拉氏菌科中的全局性胁迫响应元件DdaA的应用。DdaA的NCBI蛋白质序列为WP_000117148.1，作为药物或胁迫的靶标位点，用于防治条件致病菌环境微生物莫拉氏菌科细菌，所述的莫拉氏菌科细菌包括且不限于鲍曼不动杆菌。通过扰乱DdaA调控网络使得莫拉氏菌科细菌基因组稳定性下降。通过扰乱DdaA调控网络使得莫拉氏菌科细菌对噬菌体侵染敏感性上升。DdaA通路靶向药物通过调节莫拉氏菌科细菌对环境胁迫的响应来防治。DdaA通路靶向药物结合噬菌体疗法来防治。环境胁迫包括且不限于紫外线辐照、丝裂霉素处理。所述的药物标靶为DdaA所调控的网络。药物包括含有多重复DdaA结合序列“CGWCANNNNNTGWCG”的DNA片段或质粒。适用于多重耐药性鲍曼不动杆菌防治；可联合使用，并产生叠加效果。

公开(公告)号：CN115046973B

公开(公告)日：2024-11-26

申请号：CN202210657900.8

申请日：2022-06-12

Applicant: 浙江大学

Inventor： 华跃进 ,  钟世通 ,  陆慧智 ,  宋爽 ,  王梁燕

IPC: G01N21/64 ,  C07K19/00 ,  C12N9/50

Abstract: 本发明公开了一种基于FRET的DNA损伤检测方法及功能蛋白。利用耐辐射奇球菌中的阻遏蛋白DdrO，将黄色荧光蛋白eYFP和青色荧光蛋白eCFP分别连接于其N端和C端，构建出具有荧光能量转移特性的功能蛋白YDC；同时利用能特异性切割DdrO的耐辐射奇球菌损伤响应调控因子PprI蛋白，将PprI蛋白的91号位点的天冬氨酸（D）突变为丙氨酸（A）后得到蛋白PprI‑D91A，以降低其不存在单链DNA时的酶切活性；当体系中存在损伤产生的单链DNA时，PprI‑D91A能够快速地酶切YDC，在440 nm激发光的作用下，YDC发射光的480 nm峰升高且530 nm峰下降；同时还提供了YDC和PprI‑D91A的氨基酸序列以及检测DNA损伤的反应体系。本发明对开发新型分子生物学的工具具有重要指导意义。