公开(公告)号：CN118028539A

公开(公告)日：2024-05-14

申请号：CN202410329540.8

申请日：2024-03-21

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  周雅莉

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/94

摘要： 本发明公开了一种侵染水稻的小RNA病毒目未分科新病毒的检测引物组及RT‑PCR检测方法，根据侵染水稻的小RNA病毒目未分科新病毒的ORF1和ORF2基因序列分别设计了2对用以检测该病毒的特异性引物对，并利用设计的特异性引物对建立检测这种病毒的RT‑PCR方法。本发明的小RNA病毒目未分科新病毒的检测引物组和RT‑PCR检测方法为植物中该病毒的检测提供了一种快速、灵敏、特异、低成本的分子生物学检测方法，从而为该病毒病的诊断和防控提供检测方法。

公开(公告)号：CN116694825A

公开(公告)日：2023-09-05

申请号：CN202310832167.3

申请日：2023-07-07

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  陈远铃 ,  傅帅

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/94

摘要： 本发明公开了一种侵染紫花地丁的马铃薯卷叶病毒属新病毒的检测引物组及RT‑PCR检测方法。根据一种侵染紫花地丁的马铃薯卷叶病毒属新病毒的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)基因和ORF5基因的核苷酸序列分别设计了2对用以检测此病毒的特异性引物对，并利用设计的特异性引物对建立检测这种马铃薯卷叶病毒属新病毒的RT‑PCR方法。本发明的马铃薯卷叶病毒属新病毒的检测引物组及RT‑PCR检测方法为植物中该病毒的检测提供一种快速、灵敏、特异、准确、高效、成本低的分子检测方法，从而为该病毒病的诊断和防控提供检测方法。

公开(公告)号：CN110904053B

公开(公告)日：2020-10-20

申请号：CN201911224498.9

申请日：2019-12-04

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  何宛芹 ,  吴佳瑜 ,  钱亚娟 ,  周雪平

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗凤果花叶病毒(Pepino mosaic virus，PepMV)单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用。以提纯的PepMV病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠，经杂交瘤技术获得1株能分泌抗PepMV单抗的杂交瘤细胞株23D11，其保藏号为CGMCC No.18845。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10‑8，抗体类型及亚类为IgG1、κ轻链，该单抗与PepMV有特异性免疫反应，而不与同属的马铃薯X病毒反应，也不与番茄斑驳花叶病毒、番茄花叶病毒、番茄斑萎病毒、番茄黄化曲叶病毒、番茄黑环病毒和健康植物组织发生免疫反应。利用23D11单抗建立多种检测方法，其中ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法检测病叶的灵敏度分别达到1:40,960和1:20,480倍稀释(w/v,g/mL)。该细胞株的创制及该病毒血清学检测方法的建立为PepMV的检测诊断、流行病学调查及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN110257341A

公开(公告)日：2019-09-20

申请号：CN201910277431.5

申请日：2019-04-08

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  张彧 ,  周雪平 ,  钱亚娟

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗马铃薯M病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用。以提纯的PVM病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能分泌抗PVM单抗的杂交瘤细胞株1E1，其保藏号为CGMCC No.17284。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10-7，抗体类型及亚类为IgG1、kappa轻链，该单抗与PVM有特异性免疫反应，而不与马铃薯S病毒、马铃薯A病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒反应。利用1E1单抗建立检测马铃薯植株中PVM的ACP-ELISA、dot-ELISA和Tissue print-ELISA检测方法，其中ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测病叶的灵敏度分别达到1:163840和1:10240倍稀释(w/v,g/mL)。

公开(公告)号：CN108486065B

公开(公告)日：2019-08-16

申请号：CN201810136324.6

申请日：2018-02-09

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  王亚琴 ,  陈蕊 ,  周雪平

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗水稻瘤矮病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。用原核表达的水稻瘤矮病毒(RGDV)CP重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗RGDV单抗的杂交瘤细胞株11B6，其保藏号为CGMCC No.14897。该杂交瘤细胞株分泌的单抗腹水间接ELISA效价达到10‑8，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链。该单抗与RGDV外壳蛋白有特异性反应。利用11B6单抗为核心建立检测RGDV的ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法，这两种方法检测病叶的灵敏度分别达到1:327 680和1:20 480倍稀释(w/v,g/mL)。该杂交瘤细胞株及其单抗的获得和血清学检测方法的建立为该病毒病的检测、诊断及科学防控提供了物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN108165533B

公开(公告)日：2019-08-16

申请号：CN201810134449.5

申请日：2018-02-09

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  王亚琴 ,  周雪平 ,  陈蕊 ,  黄德青

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗水稻条纹花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。用提纯的水稻条纹花叶病毒(RSMV)为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗RSMV单抗的杂交瘤细胞株1D4，其保藏号为CGMCC No.14898。该杂交瘤细胞株分泌的单抗腹水间接ELISA效价达到10‑10，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链。该单抗与RSMV的N蛋白有特异性反应。利用1D4单抗为核心建立检测RSMV的ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法，这两种方法检测病叶的灵敏度分别达到1:2621440和1:40960倍稀释(w/v,g/mL)。该杂交瘤细胞株及其单抗的获得和血清学检测方法的建立为该病毒病的检测诊断及科学防控提供了物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN109897829A

公开(公告)日：2019-06-18

申请号：CN201910181831.6

申请日：2019-03-11

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  周雪平 ,  黄德青 ,  何宛芹 ,  王亚琴 ,  吴佳瑜 ,  谢艳

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/12 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗柑橘黄龙病菌单抗杂交瘤细胞株及其单抗的应用。柑橘黄龙病叶脉粗提液为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能分泌抗柑橘黄龙病菌单抗的杂交瘤细胞株11H9，其保藏号为CGMCC No.17285。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10-7，抗体类型及亚类为IgG1、kappa轻链，该单抗与病叶中56kDa的黄龙病菌蛋白有特异反应，与健康树叶不发生免疫反应。利用11H9单抗建立检测柑橘黄龙病菌的ACP-ELISA、dot-ELISA和Tissue blot-ELISA检测方法，其中ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测黄龙病叶粗提液的灵敏度分别达到1:20480和1:10240倍稀释(w/v,g/mL)。抗柑橘黄龙病菌单抗的制备及其检测方法的建立为柑橘黄龙病的诊断和检测、流行病学分析、无菌苗木生产及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN106636009B

公开(公告)日：2019-04-30

申请号：CN201611208960.2

申请日：2016-12-23

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  周雪平 ,  张明皓

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/08 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569

摘要： 本发明公开了一种分泌抗小麦矮缩病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗的应用。用原核表达的小麦矮缩病(WDV)CP重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗WDV单抗的杂交瘤细胞株23F4，其保藏号为CGMCC No.13297。该杂交瘤细胞株分泌的单抗腹水间接ELISA效价达到10‑9，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链。该单抗与WDV外壳蛋白有特异性反应。利用23F4单抗为核心建立检测小麦植物中WDV的ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法，这两种方法检测病叶的灵敏度分别达到1:163 840和1:5 120倍稀释(w/v,g/mL)。该杂交瘤细胞株及其单抗的获得和血清学检测方法的建立为该病毒病的检测、诊断及科学防控提供了物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN105543177B

公开(公告)日：2019-01-01

申请号：CN201610096304.1

申请日：2016-02-22

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  刘震 ,  周雪平 ,  洪健

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗柑橘黄化脉明病毒(CYVCV)单抗的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。利用原核表达的柑橘黄化脉明病毒的外壳蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗CYVCV单抗的杂交瘤细胞株18H5，其保藏号为CGMCC No.12003。该细胞株分泌单抗体腹水间接ELISA效价达10‑7，抗体类型及亚类为IgG1，kappa轻链，该单抗与CYVCV 32kD的外壳蛋白亚基有特异反应。利用18H5单抗建立检测柑橘树中CYVCV的TAS‑ELISA、dot‑ELISA和Tissue blot‑ELISA检测方法，其中TAS‑ELISA和dot‑ELISA方法检测病叶的灵敏度分别达到1:2560和1:20480倍稀释(w/v,g/mL)。抗CYVCV单抗的制备及其检测方法的建立为该柑橘病毒病的诊断和检测、流行病学分析及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN108486065A

公开(公告)日：2018-09-04

申请号：CN201810136324.6

申请日：2018-02-09

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  王亚琴 ,  陈蕊 ,  周雪平

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

CPC分类号： C07K16/10 ,  C07K2317/35 ,  G01N33/56983 ,  G01N33/577

摘要： 本发明公开了一种分泌抗水稻瘤矮病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。用原核表达的水稻瘤矮病毒(RGDV)CP重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗RGDV单抗的杂交瘤细胞株11B6，其保藏号为CGMCC No.14897。该杂交瘤细胞株分泌的单抗腹水间接ELISA效价达到10-8，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链。该单抗与RGDV外壳蛋白有特异性反应。利用11B6单抗为核心建立检测RGDV的ACP-ELISA和dot-ELISA方法，这两种方法检测病叶的灵敏度分别达到1:327 680和1:20 480倍稀释(w/v,g/mL)。该杂交瘤细胞株及其单抗的获得和血清学检测方法的建立为该病毒病的检测、诊断及科学防控提供了物质和技术支撑。