公开(公告)号：CN111269889B

公开(公告)日：2021-06-04

申请号：CN201911224500.2

申请日：2019-12-04

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  郭丽倩 ,  吴佳瑜 ,  钱亚娟 ,  周雪平

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577

摘要： 本发明公开了一种分泌抗番茄斑驳花叶病毒(Tomato mottle mosaic virus，ToMMV)单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用。以提纯的ToMMV病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能分泌抗ToMMV单抗的杂交瘤细胞株2D6，其保藏号为CGMMC NO.18846。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10‑8，其与ToMMV发生特异性免疫反应，而不与同属的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)和番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus，ToMV)反应。利用2D6单抗建立检测番茄植株中ToMMV的ACP‑ELISA、dot‑ELISA和Tissue print‑ELISA检测方法，其中ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法检测病叶的灵敏度分别达到1:40,960和1:20,480倍稀释(w/v,g/mL)。分泌ToMMV高质量单抗杂交瘤细胞株的创制及该病毒血清学检测方法的建立为ToMMV的诊断和检测、流行病学调查及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN110904053A

公开(公告)日：2020-03-24

申请号：CN201911224498.9

申请日：2019-12-04

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  何宛芹 ,  吴佳瑜 ,  钱亚娟 ,  周雪平

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗凤果花叶病毒(Pepino mosaic virus，PepMV)单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用。以提纯的PepMV病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠，经杂交瘤技术获得1株能分泌抗PepMV单抗的杂交瘤细胞株23D11，其保藏号为CGMCC No.18845。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10-8，抗体类型及亚类为IgG1、κ轻链，该单抗与PepMV有特异性免疫反应，而不与同属的马铃薯X病毒反应，也不与番茄斑驳花叶病毒、番茄花叶病毒、番茄斑萎病毒、番茄黄化曲叶病毒、番茄黑环病毒和健康植物组织发生免疫反应。利用23D11单抗建立多种检测方法，其中ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测病叶的灵敏度分别达到1:40,960和1:20,480倍稀释(w/v,g/mL)。该细胞株的创制及该病毒血清学检测方法的建立为PepMV的检测诊断、流行病学调查及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN110172450A

公开(公告)日：2019-08-27

申请号：CN201910181804.9

申请日：2019-03-11

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  黄德青 ,  吴佳瑜 ,  钱亚娟

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/12 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗甘薯茎腐病菌单抗的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。利用分离培养的甘薯茎腐病致病菌FY1710菌株为抗原免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术获得1株能分泌抗甘薯茎腐病菌单抗的杂交瘤细胞株16C10，其保藏号为CGMCC No.17286。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10-7，抗体类型及亚类为IgG1，kappa轻链。利用16C10单抗建立检测甘薯茎腐病菌的TAS-ELISA、dot-ELISA和Tissue blot-ELISA检测方法，其中TAS-ELISA和dot-ELISA方法检测甘薯茎腐病菌的灵敏度均为1:108倍稀释(菌体湿重/体积，g/mL)。抗甘薯茎腐病菌单抗的制备及其检测方法的建立为甘薯病害的诊断和检测、流行病学分析、无菌种薯种苗的生产及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN109897828A

公开(公告)日：2019-06-18

申请号：CN201910181828.4

申请日：2019-03-11

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  洪健 ,  黄悦 ,  吴佳瑜 ,  周雪平

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗李痘病毒(Plum pox virus，PPV)单抗杂交瘤细胞株及其单抗的应用。利用原核表达的李痘病毒的外壳蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能分泌抗PPV单抗的杂交瘤细胞株4A8，其保藏号为CGMCC No.17283。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10-7，抗体类型及亚类为IgG1，kappa轻链，该单抗与PPV的外壳蛋白亚基有特异反应。利用4A8单抗建立了检测梅树中PPV的TAS-ELISA、dot-ELISA检测方法，其中TAS-ELISA和dot-ELISA方法检测病叶的灵敏度分别达到1:20480和1:5120倍稀释(w/v,g/mL)。抗PPV单抗的制备及其检测方法的建立为果园李痘病毒病的诊断和检测、进出口岸检验检疫及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN109633153A

公开(公告)日：2019-04-16

申请号：CN201910081205.X

申请日：2019-01-28

申请人： 浙江大学

发明人： 吴佳瑜 ,  周雪平 ,  洪健

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/577

摘要： 本发明公开了一种检测水稻条纹花叶病毒(RSMV)的基于免疫胶体金的斑点免疫印迹方法及其应用。利用抗水稻条纹花叶病毒单克隆抗体1D4建立成快速灵敏、简单方便、准确高效地检测水稻和传毒介体电光叶蝉体内RSMV的基于免疫胶体金的斑点免疫印迹血清学检测技术，并开发成快速检测试剂盒。该斑点免疫印迹检测技术检测感染RSMV水稻病叶和携带RSMV电光叶蝉的灵敏度分别达到1:40960(w/v,g/mL)和1:5120倍稀释(单头/μL)。此简单快速、灵敏特异、准确高效的RSMV检测技术及其检测试剂盒为水稻条纹花叶病的快速诊断、抗病育种、预测预警及科学防控提供技术和物质支撑。

公开(公告)号：CN110904053B

公开(公告)日：2020-10-20

申请号：CN201911224498.9

申请日：2019-12-04

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  何宛芹 ,  吴佳瑜 ,  钱亚娟 ,  周雪平

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗凤果花叶病毒(Pepino mosaic virus，PepMV)单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用。以提纯的PepMV病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠，经杂交瘤技术获得1株能分泌抗PepMV单抗的杂交瘤细胞株23D11，其保藏号为CGMCC No.18845。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10‑8，抗体类型及亚类为IgG1、κ轻链，该单抗与PepMV有特异性免疫反应，而不与同属的马铃薯X病毒反应，也不与番茄斑驳花叶病毒、番茄花叶病毒、番茄斑萎病毒、番茄黄化曲叶病毒、番茄黑环病毒和健康植物组织发生免疫反应。利用23D11单抗建立多种检测方法，其中ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法检测病叶的灵敏度分别达到1:40,960和1:20,480倍稀释(w/v,g/mL)。该细胞株的创制及该病毒血清学检测方法的建立为PepMV的检测诊断、流行病学调查及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN109897829A

公开(公告)日：2019-06-18

申请号：CN201910181831.6

申请日：2019-03-11

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  周雪平 ,  黄德青 ,  何宛芹 ,  王亚琴 ,  吴佳瑜 ,  谢艳

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/12 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗柑橘黄龙病菌单抗杂交瘤细胞株及其单抗的应用。柑橘黄龙病叶脉粗提液为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能分泌抗柑橘黄龙病菌单抗的杂交瘤细胞株11H9，其保藏号为CGMCC No.17285。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10-7，抗体类型及亚类为IgG1、kappa轻链，该单抗与病叶中56kDa的黄龙病菌蛋白有特异反应，与健康树叶不发生免疫反应。利用11H9单抗建立检测柑橘黄龙病菌的ACP-ELISA、dot-ELISA和Tissue blot-ELISA检测方法，其中ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测黄龙病叶粗提液的灵敏度分别达到1:20480和1:10240倍稀释(w/v,g/mL)。抗柑橘黄龙病菌单抗的制备及其检测方法的建立为柑橘黄龙病的诊断和检测、流行病学分析、无菌苗木生产及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN110172450B

公开(公告)日：2020-07-17

申请号：CN201910181804.9

申请日：2019-03-11

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  黄德青 ,  吴佳瑜 ,  钱亚娟

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/12 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗甘薯茎腐病菌单抗的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。利用分离培养的甘薯茎腐病致病菌FY1710菌株为抗原免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术获得1株能分泌抗甘薯茎腐病菌单抗的杂交瘤细胞株16C10，其保藏号为CGMCC No.17286。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10‑7，抗体类型及亚类为IgG1，kappa轻链。利用16C10单抗建立检测甘薯茎腐病菌的TAS‑ELISA、dot‑ELISA和Tissue blot‑ELISA检测方法，其中TAS‑ELISA和dot‑ELISA方法检测甘薯茎腐病菌的灵敏度均为1:108倍稀释(菌体湿重/体积，g/mL)。抗甘薯茎腐病菌单抗的制备及其检测方法的建立为甘薯病害的诊断和检测、流行病学分析、无菌种薯种苗的生产及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN109897829B

公开(公告)日：2020-06-23

申请号：CN201910181831.6

申请日：2019-03-11

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  周雪平 ,  黄德青 ,  何宛芹 ,  王亚琴 ,  吴佳瑜 ,  谢艳

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/12 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗柑橘黄龙病菌单抗杂交瘤细胞株及其单抗的应用。柑橘黄龙病叶脉粗提液为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能分泌抗柑橘黄龙病菌单抗的杂交瘤细胞株11H9，其保藏号为CGMCC No.17285。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10‑7，抗体类型及亚类为IgG1、kappa轻链，该单抗与病叶中56kDa的黄龙病菌蛋白有特异反应，与健康树叶不发生免疫反应。利用11H9单抗建立检测柑橘黄龙病菌的ACP‑ELISA、dot‑ELISA和Tissue blot‑ELISA检测方法，其中ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法检测黄龙病叶粗提液的灵敏度分别达到1:20480和1:10240倍稀释(w/v,g/mL)。抗柑橘黄龙病菌单抗的制备及其检测方法的建立为柑橘黄龙病的诊断和检测、流行病学分析、无菌苗木生产及科学防控提供物质和技术支撑。

公开(公告)号：CN109897828B

公开(公告)日：2020-06-23

申请号：CN201910181828.4

申请日：2019-03-11

申请人： 浙江大学

发明人： 吴建祥 ,  洪健 ,  黄悦 ,  吴佳瑜 ,  周雪平

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种分泌抗李痘病毒(Plum pox virus，PPV)单抗杂交瘤细胞株及其单抗的应用。利用原核表达的李痘病毒的外壳蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能分泌抗PPV单抗的杂交瘤细胞株4A8，其保藏号为CGMCC No.17283。该细胞株分泌单抗腹水间接ELISA效价达10‑7，抗体类型及亚类为IgG1，kappa轻链，该单抗与PPV的外壳蛋白亚基有特异反应。利用4A8单抗建立了检测梅树中PPV的TAS‑ELISA、dot‑ELISA检测方法，其中TAS‑ELISA和dot‑ELISA方法检测病叶的灵敏度分别达到1:20480和1:5120倍稀释(w/v,g/mL)。抗PPV单抗的制备及其检测方法的建立为果园李痘病毒病的诊断和检测、进出口岸检验检疫及科学防控提供物质和技术支撑。