公开(公告)号：CN106167787A

公开(公告)日：2016-11-30

申请号：CN201610713001.X

申请日：2016-08-23

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 董玉田 ,  林二培 ,  楼雄珍 ,  牛明月 ,  黄华宏 ,  童再康

IPC: C12N5/04 ,  C12N15/82

Abstract: 本发明提供一种光皮桦木质部原生质体制备及瞬时转化的方法，其包括如下步骤：1)选择生长状况良好的光皮桦一年生植株，取当年生的茎段，用流水冲洗5‑20min，剥去树皮；2)将步骤1)获得的光皮桦茎段木质部用酶解液在黑暗中进行酶解；3)将酶解后茎段转移到MMG溶液中，将原生质体分散到MMG溶液中，用孔径为70μm的细胞筛进行过滤，收集滤液，滤液离心，用MMG溶液把收集到的原生质体重新悬浮，得到纯化的原生质体；4)在质粒浓度为1500ng/μl，PEG处理时间为10min时，木质部原生质体瞬时转化效率最高。本发明方法得到的原生质体平均密度为4.5×106个·mL‑1，平均产量为1.2×106个·g‑1·FW‑1，活性最高可达到96％，最高瞬时转化效率平均可达55％左右。

公开(公告)号：CN106167787B

公开(公告)日：2020-01-14

申请号：CN201610713001.X

申请日：2016-08-23

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 董玉田 ,  林二培 ,  楼雄珍 ,  牛明月 ,  黄华宏 ,  童再康

IPC: C12N5/04 ,  C12N15/82

Abstract: 本发明提供一种光皮桦木质部原生质体制备及瞬时转化的方法，其包括如下步骤：1)选择生长状况良好的光皮桦一年生植株，取当年生的茎段，用流水冲洗5‑20min，剥去树皮；2)将步骤1)获得的光皮桦茎段木质部用酶解液在黑暗中进行酶解；3)将酶解后茎段转移到MMG溶液中，将原生质体分散到MMG溶液中，用孔径为70μm的细胞筛进行过滤，收集滤液，滤液离心，用MMG溶液把收集到的原生质体重新悬浮，得到纯化的原生质体；4)在质粒浓度为1500ng/μl，PEG处理时间为10min时，木质部原生质体瞬时转化效率最高。本发明方法得到的原生质体平均密度为4.5×106个·mL‑1，平均产量为1.2×106个·g‑1·FW‑1，活性最高可达到96％，最高瞬时转化效率平均可达55％左右。