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公开(公告)号：CN115044576A
公开(公告)日：2022-09-13
申请号：CN202210162993.7
申请日：2022-02-22
Applicant: 浙大宁波理工学院
Abstract: 本申请公开一种酶保护剂及其应用，保护剂以pH 6.5～7.5缓冲液为溶剂，包括如下组分：甘油，25％～35％；丝氨酸，25～45mmol/L；CaCl2，5～15mmol/L。本申请采用组成较为简单的保护剂就可以让酶在常温及热胁迫环境下的稳定性得到显著提高，不仅延长了酶的使用寿命，而且其中不含任何重金属盐和还原剂，有效避免了保护剂对检测反应的干扰。
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公开(公告)号：CN112391372B
公开(公告)日：2022-06-07
申请号：CN202011294113.9
申请日：2020-11-18
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶突变体、基因工程菌及其应用。该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明通过蛋白质工程改造植物乳杆菌源的谷氨酸脱羧酶，拓宽了该蛋白催化pH活性范围；改造后的GadB基因与GadC基因共同连接于pNZ8149载体中，在乳酸乳球菌NZ3900中表达；在发酵罐中培养重组菌株L.lactis NZ3900/pNZ8149‑gadBΔC11C，用于转化谷氨酸钠生产食品级GABA，转化周期48h，产量高达33.52g/L，谷氨酸钠摩尔转化率达到91.64％；为基于乳酸菌代谢改造及发酵技术制备食品级GABA提供了优良菌株和方法支撑。
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公开(公告)号：CN112391372A
公开(公告)日：2021-02-23
申请号：CN202011294113.9
申请日：2020-11-18
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶突变体、基因工程菌及其应用。该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明通过蛋白质工程改造植物乳杆菌源的谷氨酸脱羧酶，拓宽了该蛋白催化pH活性范围；改造后的GadB基因与GadC基因共同连接于pNZ8149载体中，在乳酸乳球菌NZ3900中表达；在发酵罐中培养重组菌株L.lactis NZ3900/pNZ8149‑gadBΔC11C，用于转化谷氨酸钠生产食品级GABA，转化周期48h，产量高达33.52g/L，谷氨酸钠摩尔转化率达到91.64％；为基于乳酸菌代谢改造及发酵技术制备食品级GABA提供了优良菌株和方法支撑。
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公开(公告)号：CN116254253B
公开(公告)日：2024-06-28
申请号：CN202211420928.6
申请日：2022-11-11
Applicant: 浙大宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种通过DNA合成改组获得的热稳定性得到显著提升的谷氨酸脱羧酶突变酶及应用。该突变酶筛选自通过DNA合成改组构建的突变文库，该突变文库由已知可以提高谷氨酸脱羧酶热稳定性和催化活性的突变位点(即正向突变)的随机组合体构成。通过对该特别文库的初筛和复筛，获得了热稳定性和催化活性都优于野生型酶的突变酶D54A‑H181K‑D203E‑S325A：该突变酶的半失活温度为71.23℃，较野生型酶(62.04℃)提高了9.19℃；催化效率较野生型酶提高了59.5％。该突变酶在催化底物生成γ‑氨基丁酸的过程中具有更好的热稳定性和催化效率，有助于γ‑氨基丁酸及其衍生物的大规模生物制备。
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公开(公告)号：CN117701597A
公开(公告)日：2024-03-15
申请号：CN202410051160.2
申请日：2024-01-12
Applicant: 浙大宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种S‑腺苷同型半胱氨酸水解酶基因及其应用，涉及生物工程领域。本发明开发出一种具有高表达能力的和较好可溶性的SAHH基因序列，在466个密码子中有18个密码子发生同义突变，其中有14个是从高频密码子突变为使用频率较低的密码子，只有4个编码脯氨酸的密码子是从低频替换为较高频，转入该基因序列的基因工程菌在5L发酵罐中SAHH的发酵水平高达14.03g/L，适用于工业生产的需求。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114958610A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210705863.3
申请日：2022-06-21
Applicant: 浙大宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了苯乳酸在制备酵母菌裂解液中的应用、试剂盒及方法。本发明研究发现苯乳酸可以用于裂解酵母菌，可以用来提取酵母菌基因组时裂解酵母菌的细胞壁。本发明相对传统酵母DNA提取采用的蜗牛酶处理法来说，具有成本低、提取时间短，且不使用有毒的β‑巯基乙醇，降低实验的危险性。同时苯乳酸较蜗牛酶来说，易于保存且不易失活。此外，本发明可以与蜗牛酶处理法的酵母核酸后续获取、纯化和回收(包括吸附柱法、磁珠法和有机溶剂沉淀法等)很好的兼容，不需额外开发后续处理步骤。
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公开(公告)号：CN119242599A
公开(公告)日：2025-01-03
申请号：CN202411354514.7
申请日：2024-09-26
Applicant: 浙大宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种活力提升的4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体及其应用，所述4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体由大肠杆菌(Escherichia coli)来源的野生型4HPA3H酶经过突变所得，野生型4HPA3H酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，具体突变为以下任意一种：(1)M205F；(2)T398S。本发明4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体，M205F、T398S两种突变体全细胞催化对羟基苯乳酸活性相对于WT提高了1.70和1.24倍。
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公开(公告)号：CN114958610B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202210705863.3
申请日：2022-06-21
Applicant: 浙大宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了苯乳酸在制备酵母菌裂解液中的应用、试剂盒及方法。本发明研究发现苯乳酸可以用于裂解酵母菌，可以用来提取酵母菌基因组时裂解酵母菌的细胞壁。本发明相对传统酵母DNA提取采用的蜗牛酶处理法来说，具有成本低、提取时间短，且不使用有毒的β‑巯基乙醇，降低实验的危险性。同时苯乳酸较蜗牛酶来说，易于保存且不易失活。此外，本发明可以与蜗牛酶处理法的酵母核酸后续获取、纯化和回收(包括吸附柱法、磁珠法和有机溶剂沉淀法等)很好的兼容，不需额外开发后续处理步骤。
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公开(公告)号：CN116254253A
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202211420928.6
申请日：2022-11-11
Applicant: 浙大宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种通过DNA合成改组获得的热稳定性得到显著提升的谷氨酸脱羧酶突变酶及应用。该突变酶筛选自通过DNA合成改组构建的突变文库，该突变文库由已知可以提高谷氨酸脱羧酶热稳定性和催化活性的突变位点(即正向突变)的随机组合体构成。通过对该特别文库的初筛和复筛，获得了热稳定性和催化活性都优于野生型酶的突变酶D54A‑H181K‑D203E‑S325A：该突变酶的半失活温度为71.23℃，较野生型酶(62.04℃)提高了9.19℃；催化效率较野生型酶提高了59.5％。该突变酶在催化底物生成γ‑氨基丁酸的过程中具有更好的热稳定性和催化效率，有助于γ‑氨基丁酸及其衍生物的大规模生物制备。
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公开(公告)号：CN116144614A
公开(公告)日：2023-05-23
申请号：CN202211293039.8
申请日：2022-10-21
Applicant: 浙大宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体及其应用，所述4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体由大肠杆菌(Escherichia coli)来源的野生型4HPA3H酶经过突变所得，野生型4HPA3H酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，突变方式为以下一种：(1)G209F；(2)A298F；(3)G209F/A298F。本发明4‑羟基苯乙酸‑3‑羟化酶突变体，其中G209F、A298F两种突变体全细胞催化白藜芦醇活性相对于WT提高了2.05和1.43倍，同时将两个位点进行叠加所得的突变体G209F/A298F全细胞催化白藜芦醇活性相较于WT提高了1.46倍。
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