公开(公告)号：CN108018334B

公开(公告)日：2021-07-16

申请号：CN201810073368.9

申请日：2018-01-25

申请人： 河套学院

发明人： 贾芳 ,  杨江流

IPC分类号： C12Q1/6851

摘要： 本发明涉及生物酶活性测定技术领域，特别涉及一种耐药性大肠杆菌整合酶活性测定方法，包括：提取大肠杆菌质粒DNA；以质粒DNA为模板，PCR扩增出编码整合酶的整合子基因intI，并连接到表达载体pEASY‑E1上，再转化到大肠杆菌BL21(DE3)中；PCR扩增出含整合酶基因重组位点attI和基因盒基因重组位点attC的DNA片段，并连接到载体质粒PUC19上，再转化到大肠杆菌DH5α；实时荧光定量PCR测定发生整和作用的拷贝数和未发生作用的拷贝数，计算整合效率，得整合酶活性大小。本发明分别构建带有整合酶的整合子基因intI的载体和含整合酶基因重组位点attI和基因盒基因重组位点attC的载体，体外测定并计算整合效率的大小，从而反应出整合酶活性大小，为研究大肠杆菌的耐药性提供理论基础。

公开(公告)号：CN105602974A

公开(公告)日：2016-05-25

申请号：CN201510681476.0

申请日：2015-10-13

申请人： 河套学院

发明人： 贾芳 ,  杨江流

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/66

摘要： 本发明公开了一种耐药性大肠杆菌整合酶整合载体pUC19-attI-400-attC的构建方法，构建了含有attI和attC重组位点且在attI和attC位点之间间隔440bpDNA序列的重组载体，载体精小，只有3270bp，可以同时进行切割attI和attC位点，也可以单独切开attC位点，载体本身还含有10多种多克隆位点，便于使用者选用适合的限制性内切酶来研究整合酶的作用位点，它带有氨苄抗性，便于筛选，可用于体外检测细菌耐药性整合酶整合活性的载体模型，也可以用来探索其他细菌整合子的整合机制。

公开(公告)号：CN108018334A

公开(公告)日：2018-05-11

申请号：CN201810073368.9

申请日：2018-01-25

申请人： 河套学院

发明人： 贾芳 ,  杨江流

IPC分类号： C12Q1/6851

摘要： 本发明涉及生物酶活性测定技术领域，特别涉及一种耐药性大肠杆菌整合酶活性测定方法，包括：提取大肠杆菌质粒DNA；以质粒DNA为模板，PCR扩增出编码整合酶的整合子基因intI，并连接到表达载体pEASY‑E1上，再转化到大肠杆菌BL21(DE3)中；PCR扩增出含整合酶基因重组位点attI和基因盒基因重组位点attC的DNA片段，并连接到载体质粒PUC19上，再转化到大肠杆菌DH5α；实时荧光定量PCR测定发生整和作用的拷贝数和未发生作用的拷贝数，计算整合效率，得整合酶活性大小。本发明分别构建带有整合酶的整合子基因intI的载体和含整合酶基因重组位点attI和基因盒基因重组位点attC的载体，体外测定并计算整合效率的大小，从而反应出整合酶活性大小，为研究大肠杆菌的耐药性提供理论基础。