公开(公告)号：CN104531699B

公开(公告)日：2017-03-15

申请号：CN201410525824.0

申请日：2014-10-09

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 杨国宇 ,  高会贞 ,  郭豫杰 ,  王月影 ,  李和平 ,  朱河水 ,  钟凯 ,  鲁维飞 ,  韩立强 ,  查光明

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/67

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种增强外源基因表达的猪的UCOE调控元件片段。所述UCOE调控元件片段的碱基序列如序列表所示。该调控元件片段在外源蛋白表达的方面，通过构建重组质粒表达载体pCpG-Mini-GFP-UCOE，转染HEK293T细胞，可以增强GFP表达。本发明以人的1.5kbUCOE片段作为对照，利用酶切方法和RT-PCR方法将猪UCOE片段分割成不同长度的片段，构建不同表达载体，转染HEK293T细胞，通过实时荧光定量PCR和Western blot技术检测报告基因GFP的相对表达量筛选出最佳的能够增强外源基因表达的UCOE片段序列，即本发明所请求保护的基因序列。

公开(公告)号：CN104099332A

公开(公告)日：2014-10-15

申请号：CN201410204418.4

申请日：2014-05-12

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 郭豫杰 ,  杨国宇 ,  高会贞 ,  王月影 ,  钟凯 ,  鲁维飞 ,  韩立强 ,  张超

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种猪akirin2基因启动子及其应用，其核苷酸序列如SEQ：ID：1所示。本发明所述的猪akirin2基因启动子在外源基因真核表达、转基因猪中的应用。本发明确定了200bp的最小启动子片段的活性最强。本发明提供寡核苷酸引物序列、克隆载体、表达载体、转化的宿主、外源蛋白表达的方法。这些为进一步开展猪akirin2基因在猪的肌卫星细胞及其他相关细胞中调控的研究提供了基础，同时可用于哺乳动物细胞中进行外源蛋白的表达及转基因研究。

公开(公告)号：CN104099332B

公开(公告)日：2016-10-26

申请号：CN201410204418.4

申请日：2014-05-12

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 郭豫杰 ,  杨国宇 ,  高会贞 ,  王月影 ,  钟凯 ,  鲁维飞 ,  韩立强 ,  张超

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种猪akirin2基因启动子及其应用，其核苷酸序列如SEQ：ID：1所示。本发明所述的猪akirin2基因启动子在外源基因真核表达、转基因猪中的应用。本发明确定了200bp的最小启动子片段的活性最强。本发明提供寡核苷酸引物序列、克隆载体、表达载体、转化的宿主、外源蛋白表达的方法。这些为进一步开展猪akirin2基因在猪的肌卫星细胞及其他相关细胞中调控的研究提供了基础，同时可用于哺乳动物细胞中进行外源蛋白的表达及转基因研究。

公开(公告)号：CN104531699A

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201410525824.0

申请日：2014-10-09

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 杨国宇 ,  高会贞 ,  郭豫杰 ,  王月影 ,  李和平 ,  朱河水 ,  钟凯 ,  鲁维飞 ,  韩立强 ,  查光明

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/67

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种增强外源基因表达的猪的UCOE调控元件片段。所述UCOE调控元件片段的碱基序列如序列表所示。该调控元件片段在外源蛋白表达的方面，通过构建重组质粒表达载体pCpG-Mini-GFP-UCOE，转染HEK293T细胞，可以增强GFP表达。本发明以人的1.5kbUCOE片段作为对照，利用酶切方法和RT-PCR方法将猪UCOE片段分割成不同长度的片段，构建不同表达载体，转染HEK293T细胞，通过实时荧光定量PCR和Western blot技术检测报告基因GFP的相对表达量筛选出最佳的能够增强外源基因表达的UCOE片段序列，即本发明所请求保护的基因序列。