公开(公告)号：CN116732094A

公开(公告)日：2023-09-12

申请号：CN202310874873.4

申请日：2023-07-17

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 王潇然 ,  周娜 ,  王奥轩 ,  王东辉 ,  石永春 ,  王燃

IPC: C12N15/84 ,  G01N1/31 ,  A01H5/12 ,  A01H6/00

Abstract: 本发明公开了一种高效地黄瞬时转化及检测的方法，包括以下步骤：S1：携带有报告基因载体构建并载入根癌农杆菌；S2：农杆菌介导的地黄瞬时转化；S3：GUS组织化学染色；S4：荧光信号检测；S5：瞬时转化地黄叶片的分子检测，采用混合酶切连接法将报告基因序列插入到表达载体中，该报告基因由花椰菜病毒的35S启动子驱动，获得携带报告基因的表达载体，本发明瞬时转化结果的鉴定方法有改进，由于地黄叶片材料本身的原因，导致在进行GUS染色实验时，GUS染液不能成功进入叶片中，导致GUS染色实验无法成功，本发明通过用手术刀柄轻微按压来创造机械损伤，使GUS染液能成功进入叶片，进而成功显色。