在甜瓜毛状根中验证CRISPR或Cas9载体活性及基因功能的方法

    公开(公告)号:CN119082175A

    公开(公告)日:2024-12-06

    申请号:CN202411240080.8

    申请日:2024-09-05

    Abstract: 本发明公开了在甜瓜毛状根中验证CRISPR或Cas9载体活性及基因功能的方法,使用萌发两天的甜瓜种子的子叶作为外植体,利用发根农杆菌K599进行侵染,经过共培养,毛状根诱导,以绿色荧光蛋白eGFP作为转基因毛状根的筛选标记,可在1个月左右获得转化CRISPR/Cas9载体的毛状根。利用该转化材料,我们分析了多个基因的基因编辑靶位点的可用性,发现增加sgRNA表达单元拷贝数对于基因编辑效率具有促进作用,并且我们发现CmRHL1被编辑后,甜瓜根毛不能形成。因此,本发明为验证CRISPR/Cas9载体活性以及研究基因在根发育过程中的功能,提供了一种方便、快捷的途径,对于甜瓜的稳定遗传转化方法是一个有利补充。

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