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发明公开
融合酶的制备方法及融合酶审中-实审

公开(公告)号：CN114480472A

公开(公告)日：2022-05-13

申请号：CN202210081967.1

申请日：2022-01-24

申请人： 河北工业大学

发明人： 高静 , 李彦洁 , 姜艳军 , 周丽亚

IPC分类号： C12N15/81 , C12N9/08 , C07K19/00 , C12R1/84

摘要： 本发明提供了一种融合酶的制备方法及融合酶，本发明的融合酶的制备方法首先构建融合酶质粒，之后提取融合酶质粒，并将其转入到毕赤酵母中，进行发酵表达；再利用毕赤酵母制备粗酶液，并进行融合酶的分离纯化。在非特异性过氧化酶(UPO)的突变体JaWa、SoLo、WamPa的C端融合6×His‑SUMO标签，以及融合酶在毕赤酵母中的诱导表达及其后期的分离纯化，JaWa可去除酶的过氧化活性，WamPa本身在有机溶剂中具有良好的稳定性，而SUMO标签能可有效提高酶的表达量，使之高效的催化反应。此外，将JaWa、SoLo、WamPa融合6×His‑SUMO标签后能够利用组氨酸与金属离子Ni2+的螯合作用进行分离纯化，分离纯化后的酶催化活性大大提高。