公开(公告)号：CN102226203B

公开(公告)日：2013-01-09

申请号：CN201110127319.7

申请日：2011-05-17

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 欧阳伟 ,  王永山 ,  马金荣 ,  张海彬

IPC: C12N15/85 ,  A61K48/00 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明涉及双chU6启动子双shRNA表达质粒的构建及应用，属于生物制药领域。构建鸡U6启动子（chU6），设计两个靶向分别针对IBDVVP1和VP2基因的小发夹RNA（shRNA）：VP1-shRNA2550和VP2-shRNA392。构建表达质粒pSilencer2.1+2chU6+VP1VP2shRNA，转染鸡胚成纤维细胞（CEF），接种IBDV，可抑制病毒复制。将表达质粒pSilencer2.1+2chU6+VP1VP2shRNA与IBDV混合，接种于10日龄SPF鸡胚尿囊腔，可保护鸡胚免受IBDV感染。本发明构建的双chU6启动子双shRNA表达质粒是一种新型IBDV防治制剂，具有良好的实用价值和推广前景。

公开(公告)号：CN101624421A

公开(公告)日：2010-01-13

申请号：CN200910184043.9

申请日：2009-08-12

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 王永山 ,  欧阳伟 ,  周宇 ,  王晓丽 ,  何孔旺 ,  张海彬 ,  范红结 ,  王忠灿 ,  唐雨德

IPC: C07K14/08 ,  C12N15/85 ,  C12P21/02 ,  C07K1/36 ,  G01N33/543 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明涉及传染性法氏囊病病毒变异株VP2基因病毒样颗粒重组蛋白，属于生物制药领域。将IBDV变异株(AH1)VP2基因，克隆、转化、转染，获得重组杆状病毒vBac-VP2。感染的Sf9昆虫细胞具有特异性荧光，抗原效价在1.6×10 3 以上，重组VP2蛋白分子量53kDa，在感染细胞中呈病毒样颗粒形态。用纯化的重组VP2蛋白为包被抗原建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性和敏感性；免疫鸡，可抵抗IBDV强毒攻击，保护率达到100％。本发明用IBDV变异株VP2基因制备的新型病毒样颗粒重组VP2蛋白对当前IBDV流行毒株的免疫预防针对性更高，具有良好的实用价值和推广前景。

公开(公告)号：CN102226203A

公开(公告)日：2011-10-26

申请号：CN201110127319.7

申请日：2011-05-17

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 欧阳伟 ,  王永山 ,  马金荣 ,  张海彬

IPC: C12N15/85 ,  A61K48/00 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明涉及双chU6启动子双shRNA表达质粒的构建及应用，属于生物制药领域。构建鸡U6启动子（chU6），设计两个靶向分别针对IBDVVP1和VP2基因的小发夹RNA（shRNA）：VP1-shRNA2550和VP2-shRNA392。构建表达质粒pSilencer2.1+2chU6+VP1VP2shRNA，转染鸡胚成纤维细胞（CEF），接种IBDV，可抑制病毒复制。将表达质粒pSilencer2.1+2chU6+VP1VP2shRNA与IBDV混合，接种于10日龄SPF鸡胚尿囊腔，可保护鸡胚免受IBDV感染。本发明构建的双chU6启动子双shRNA表达质粒是一种新型IBDV防治制剂，具有良好的实用价值和推广前景。

公开(公告)号：CN103773735B

公开(公告)日：2015-12-02

申请号：CN201310565243.5

申请日：2013-11-13

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 欧阳伟 ,  王永山 ,  潘群兴 ,  王晓丽 ,  夏兴霞 ,  刘华洁 ,  张海彬

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种高表达gga-miR-9*的鸡胚成纤维传代细胞株DF-miR-9*，属于生物技术领域。将细胞内源性gga-miR-9*运用慢病毒病毒表达系统构建含有pri-gga-miR-9*的重组慢病毒VL+miR-9*，用VL+miR-9*感染鸡胚成纤维传代细胞系DF-1，获得高表达gga-miR-9*的鸡胚成纤维传代细胞株DF-miR-9*。用DF-miR-9*培养传染性法氏囊病病毒（IBDV），IBDV滴度比用正常DF-1细胞培养的病毒滴度高10倍以上。本发明的高表达gga-miR-9*鸡胚成纤维传代细胞株DF-miR-9*用于IBDV抗原制备和疫苗生产，病毒滴度高，具有巨大的生产应用价值。

公开(公告)号：CN103773735A

公开(公告)日：2014-05-07

申请号：CN201310565243.5

申请日：2013-11-13

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 欧阳伟 ,  王永山 ,  潘群兴 ,  王晓丽 ,  夏兴霞 ,  刘华洁 ,  张海彬

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种高表达gga-miR-9*的鸡胚成纤维传代细胞株DF-miR-9*，属于生物技术领域。将细胞内源性gga-miR-9*运用慢病毒病毒表达系统构建含有pri-gga-miR-9*的重组慢病毒VL+miR-9*，用VL+miR-9*感染鸡胚成纤维传代细胞系DF-1，获得高表达gga-miR-9*的鸡胚成纤维传代细胞株DF-miR-9*。用DF-miR-9*培养传染性法氏囊病病毒（IBDV），IBDV滴度比用正常DF-1细胞培养的病毒滴度高10倍以上。本发明的高表达gga-miR-9*鸡胚成纤维传代细胞株DF-miR-9*用于IBDV抗原制备和疫苗生产，病毒滴度高，具有巨大的生产应用价值。