公开(公告)号：CN118909984A

公开(公告)日：2024-11-08

申请号：CN202410979588.3

申请日：2024-07-22

Applicant: 江苏大学

Inventor： 徐庆刚 ,  谢润锋 ,  石宇 ,  朱梦娟 ,  陈东锋

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供一种突变型热稳定性萤火虫荧光素酶及其制备方法，所述萤火虫荧光素酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示，本发明利用基因工程的方法对萤火虫荧光素酶基因进行定点突变，通过引入E178K，E354K，H431R，A482T四个氨基酸位点的替换，获得一种突变型热稳定性萤火虫荧光素酶，并在酶蛋白N末端和C末端融合促溶标签，大大提高了表达的萤火虫荧光素酶的可溶性和热稳定性。该荧光素酶热稳定性高，在室温(25℃)下14天，能保持60～70％活性；35℃下保温60min，能够保持97％相对活性；40℃下保温25min，能够保持90％左右的相对活性；保温50～60min，能够保持50％左右的相对活性。