公开(公告)号：CN105255945A

公开(公告)日：2016-01-20

申请号：CN201510684572.0

申请日：2015-10-22

Applicant: 江苏大学

Inventor： 朱姗颖 ,  何华纲 ,  吕增磊 ,  黄海 ,  常鹏飞 ,  吴岩

IPC: C12N15/866 ,  C12N5/10 ,  C12P21/02 ,  C07K14/435 ,  A61K38/17 ,  A61P29/00

CPC classification number: Y02A50/473

Abstract: 本发明公开了一种使用家蚕制备镇痛活性多肽的方法，属于基因工程领域。所述制备方法如下：根据家蚕核型多角体病毒（BmNPV）密码子使用频率优化芋螺毒素ω-MVIIA基因序列，经化学合成后连入供体质粒pFastBacDual，再引入绿色荧光蛋白（EGFP）基因，构建重组供体质粒pFBD-MVIIA/EGFP。使用Bac-to-Bac方法将MVIIA/EGFP转座到BmNPV，形成重组病毒vBmMVIIA/EGFP。将重组病毒DNA转染至家蚕细胞，获得BV粒子，借助绿色荧光测定BV粒子滴度后，以200 pfu的BV粒子注射家蚕，感染5天后，收获家蚕血液。通过小鼠醋酸扭体试验证实，表达芋螺毒素ω-MVIIA的受感染家蚕的血液具有显著的镇痛活性，平均扭体次数仅3.55次，明显高于注射生理盐水的对照组（37.30次）。本发明为表达具有镇痛活性的芋螺毒素ω-MVIIA提供了新的方法，具有潜在的应用价值。

公开(公告)号：CN105255945B

公开(公告)日：2019-02-05

申请号：CN201510684572.0

申请日：2015-10-22

Applicant: 江苏大学

Inventor： 朱姗颖 ,  何华纲 ,  吕增磊 ,  黄海 ,  常鹏飞 ,  吴岩

IPC: C12N15/866 ,  C12N5/10 ,  C12P21/02 ,  C07K14/435 ,  A61K38/17 ,  A61P29/00

CPC classification number: Y02A50/473

Abstract: 本发明公开了一种使用家蚕制备镇痛活性多肽的方法，属于基因工程领域。所述制备方法如下：根据家蚕核型多角体病毒（BmNPV）密码子使用频率优化芋螺毒素ω‑MVIIA基因序列，经化学合成后连入供体质粒pFastBacDual，再引入绿色荧光蛋白（EGFP）基因，构建重组供体质粒pFBD‑MVIIA/EGFP。使用Bac‑to‑Bac方法将MVIIA/EGFP转座到BmNPV，形成重组病毒vBmMVIIA/EGFP。将重组病毒DNA转染至家蚕细胞，获得BV粒子，借助绿色荧光测定BV粒子滴度后，以200 pfu的BV粒子注射家蚕，感染5天后，收获家蚕血液。通过小鼠醋酸扭体试验证实，表达芋螺毒素ω‑MVIIA的受感染家蚕的血液具有显著的镇痛活性，平均扭体次数仅3.55次，明显高于注射生理盐水的对照组（37.30次）。本发明为表达具有镇痛活性的芋螺毒素ω‑MVIIA提供了新的方法，具有潜在的应用价值。

公开(公告)号：CN105255932B

公开(公告)日：2018-12-14

申请号：CN201510684291.5

申请日：2015-10-22

Applicant: 江苏大学

Inventor： 朱姗颖 ,  吴莺 ,  常鹏飞 ,  黄海 ,  吕增磊 ,  何华纲

IPC: C12N15/70 ,  C07K14/435 ,  A61K38/17 ,  A61P29/00

Abstract: 本发明公开了一种具镇痛活性的芋螺毒素变异体GMVIIA的制备方法，属于基因工程领域；所述制备方法如下：根据大肠杆菌密码子使用频率优化芋螺毒素变异体GMVIIA基因序列，经化学合成后连入原核表达载体pET‑32a载体，然后将重组质粒导入大肠杆菌Origami（DE3）菌株，经IPTG诱导后，实现重组蛋白Trx‑GMVIIA的高效可溶性表达；采用镍离子亲和层析方法分离纯化重组蛋白Trx‑GMVIIA；采用肠激酶切割重组蛋白Trx‑GMVIIA释放出GMVIIA，进一步用镍离子亲和层析去除Trx标签，获得芋螺毒素变异体GMVIIA。采用小鼠醋酸扭体法证实，本发明制备的芋螺毒素变异体GMVIIA具有显著的镇痛活性，在镇痛领域具有潜在的应用价值。

公开(公告)号：CN105255932A

公开(公告)日：2016-01-20

申请号：CN201510684291.5

申请日：2015-10-22

Applicant: 江苏大学

Inventor： 朱姗颖 ,  吴莺 ,  常鹏飞 ,  黄海 ,  吕增磊 ,  何华纲

IPC: C12N15/70 ,  C07K14/435 ,  A61K38/17 ,  A61P29/00

Abstract: 本发明公开了一种具镇痛活性的芋螺毒素变异体GMVIIA的制备方法，属于基因工程领域；所述制备方法如下：根据大肠杆菌密码子使用频率优化芋螺毒素变异体GMVIIA基因序列，经化学合成后连入原核表达载体pET-32a载体，然后将重组质粒导入大肠杆菌Origami（DE3）菌株，经IPTG诱导后，实现重组蛋白Trx-GMVIIA的高效可溶性表达；采用镍离子亲和层析方法分离纯化重组蛋白Trx-GMVIIA；采用肠激酶切割重组蛋白Trx-GMVIIA释放出GMVIIA，进一步用镍离子亲和层析去除Trx标签，获得芋螺毒素变异体GMVIIA。采用小鼠醋酸扭体法证实，本发明制备的芋螺毒素变异体GMVIIA具有显著的镇痛活性，在镇痛领域具有潜在的应用价值。