公开(公告)号：CN113337495B

公开(公告)日：2022-10-11

申请号：CN202110620019.6

申请日：2021-06-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈献忠 ,  杨海泉 ,  沈微 ,  周俊波

IPC: C12N9/90 ,  C12N9/88 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高唾液酸产量的方法与应用，属于酶工程、微生物工程领域。本发明对N‑乙酰葡萄糖胺‑2‑差向异构酶的酶催化活性关键氨基酸位点Gly371进行饱和突变，筛选提高催化效率的酶突变体。通过过量表达催化效率提高的N‑乙酰葡萄糖胺‑2‑差向异构酶突变体和N‑乙酰神经氨酸醛缩酶，提高重组大肠杆菌催化生产唾液酸的生产效率；采用本发明构建的含有G371C的重组大肠杆菌和含有G371A的重组大肠杆菌全细胞催化制备得到Neu5Ac产量分别为352.0和353.6mmol·L‑1，显著高于野生型重组菌，同时，含有突变体的重组菌株催化GlcNAc转化生成Neu5Ac的转化效率，显著高于对照菌株。

公开(公告)号：CN104878035A

公开(公告)日：2015-09-02

申请号：CN201510189018.5

申请日：2015-04-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈献忠 ,  周俊波 ,  杨海泉 ,  沈微

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/61 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12P19/26

Abstract: 本发明公开了一种产N-乙酰神经氨酸重组微生物的构建方法及应用。通过密码子优化、基因克隆等分子生物学技术分别构建了表达N-乙酰葡萄糖胺-2-异构酶基因和N-乙酰神经氨酸醛缩酶基因的两株重组大肠杆菌。两株重组微生物经诱导培养、按一定比例混合后，能够高效的生产N-乙酰神经氨酸。以N-乙酰葡萄糖胺和丙酮酸钠为底物，以两株重组微生物作为全细胞为催化剂，经催化反应后N-乙酰神经氨酸产量可达260mM(80.5g/L)，最高底物转化率达43.3％。

公开(公告)号：CN113337495A

公开(公告)日：2021-09-03

申请号：CN202110620019.6

申请日：2021-06-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈献忠 ,  杨海泉 ,  沈微 ,  周俊波

IPC: C12N9/90 ,  C12N9/88 ,  C12N15/61 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种提高唾液酸产量的方法与应用，属于酶工程、微生物工程领域。本发明对N‑乙酰葡萄糖胺‑2‑差向异构酶的酶催化活性关键氨基酸位点Gly371进行饱和突变，筛选提高催化效率的酶突变体。通过过量表达催化效率提高的N‑乙酰葡萄糖胺‑2‑差向异构酶突变体和N‑乙酰神经氨酸醛缩酶，提高重组大肠杆菌催化生产唾液酸的生产效率；采用本发明构建的含有G371C的重组大肠杆菌和含有G371A的重组大肠杆菌全细胞催化制备得到Neu5Ac产量分别为352.0和353.6mmol·L‑1，显著高于野生型重组菌，同时，含有突变体的重组菌株催化GlcNAc转化生成Neu5Ac的转化效率，显著高于对照菌株。