公开(公告)号：CN120060221A

公开(公告)日：2025-05-30

申请号：CN202510235821.1

申请日：2025-02-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 龚劲松 ,  卞诗倩 ,  史劲松 ,  许正宏 ,  苏畅 ,  李恒 ,  刘仪琳 ,  吴矗懋

IPC: C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/40 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及提高脂肪腈水解酶底物特异性和催化活性的改造方法及改造获得的突变体，属于酶工程技术领域。本发明以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的待改造亲本腈水解酶出发，将其与脂肪腈底物结合，确定蛋白质识别通道中与底物结合相关的待改造位点，综合定点突变、饱和突变、组合突变和迭代突变，结合半理性设计和机器学习的方法，确定亲本腈水解酶中与底物结合相关的关键位点及与其协同发挥作用的临近位点，筛选得到一系列对脂肪腈底物特异性和催化活性提升的腈水解酶突变体，对3‑氯丙腈底物的转化率达99％以上，酶活性最高为58.35U/mL，分5个批次添加3‑氯丙腈后转化在190分钟内完成，累计产物浓度达到108.52g/L，实现了脂肪腈底物的高效转化。