公开(公告)号：CN115992116B

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202210886241.5

申请日：2022-07-26

Applicant: 扬州大学

Inventor： 杨章平 ,  张志鹏 ,  杨奕 ,  陈代杰 ,  陈志 ,  徐天乐

IPC: C12N9/36 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10 ,  C12N5/071 ,  A61K38/47 ,  A61P31/04 ,  A61P37/08 ,  A61P15/14 ,  A61P29/00 ,  A23C9/12 ,  A23K20/189 ,  A23K50/40 ,  A23L3/3571

Abstract: 本发明属于生物工程领域，公开了一种利用原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的多功能奶牛溶菌酶：包括奶牛溶菌酶、β‑乳球蛋白肽和EGFP绿色荧光标签融合蛋白，相比于传统毕赤氏酵母作为生物反应器，以原代奶牛乳腺上皮细胞作为生物反应器制备的溶菌酶的活性显著提高；所述的奶牛溶菌酶可极显著降低细菌对细胞的损伤，细胞凋亡率下降92.5％，可有效治疗细菌诱导的小鼠乳腺炎；奶牛溶菌酶可作为饲料添加剂，在胃的酸性环境中具有高构象稳定性，可消化分解微生物，分解后的组分被肠道吸收为自身的营养成分；所述奶牛溶菌酶含有特定的β‑乳球蛋白肽，可诱导对乳蛋白的口服免疫耐受，能够减轻牛乳蛋白过敏症的急性症状。

公开(公告)号：CN115992116A

公开(公告)日：2023-04-21

申请号：CN202210886241.5

申请日：2022-07-26

Applicant: 扬州大学

Inventor： 杨章平 ,  张志鹏 ,  杨奕 ,  陈代杰 ,  陈志 ,  徐天乐

IPC: C12N9/36 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10 ,  C12N5/071 ,  A61K38/47 ,  A61P31/04 ,  A61P37/08 ,  A61P15/14 ,  A61P29/00 ,  A23C9/12 ,  A23K20/189 ,  A23K50/40 ,  A23L3/3571

Abstract: 本发明属于生物工程领域，公开了一种利用原代奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的多功能奶牛溶菌酶：包括奶牛溶菌酶、β‑乳球蛋白肽和EGFP绿色荧光标签融合蛋白，相比于传统毕赤氏酵母作为生物反应器，以原代奶牛乳腺上皮细胞作为生物反应器制备的溶菌酶的活性显著提高；所述的奶牛溶菌酶可极显著降低细菌对细胞的损伤，细胞凋亡率下降92.5％，可有效治疗细菌诱导的小鼠乳腺炎；奶牛溶菌酶可作为饲料添加剂，在胃的酸性环境中具有高构象稳定性，可消化分解微生物，分解后的组分被肠道吸收为自身的营养成分；所述奶牛溶菌酶含有特定的β‑乳球蛋白肽，可诱导对乳蛋白的口服免疫耐受，能够减轻牛乳蛋白过敏症的急性症状。

公开(公告)号：CN110643634A

公开(公告)日：2020-01-03

申请号：CN201911025737.8

申请日：2019-10-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 张志鹏 ,  杨章平 ,  杨奕 ,  陈代杰 ,  张慧敏

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N15/65 ,  C12N15/12 ,  C07K14/47 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明提供一种奶牛气管抗菌肽基因（TAP）乳腺特异性表达质粒及其构建方法和应用。具体地，PCR扩增TAP基因的编码序列，将其插入到携带增强的绿色荧光蛋白基因的通用表达载体pEGFP-N1的多克隆位点中。通用表达载体pEGFP-N1经Ase I+Hind III双酶切，去除CMV启动子，克隆奶牛乳腺特异性表达β-乳球蛋白基因（BLG）启动子序列并取代Ase I和HindIII酶切位点，构建奶牛气管抗菌肽基因（TAP）乳腺特异性表达质粒。采用上述重组质粒转染奶牛乳腺上皮细胞,得到的细胞系可用于分泌具有生物活性的奶牛气管抗菌肽，用于奶牛乳腺组织免疫机制研究；该重组质粒还可应用于基因治疗奶牛乳房炎制剂的研发。

公开(公告)号：CN110607324A

公开(公告)日：2019-12-24

申请号：CN201911025733.X

申请日：2019-10-25

Applicant: 扬州大学

Inventor： 杨章平 ,  张志鹏 ,  杨奕 ,  陈代杰 ,  张慧敏

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/56 ,  A61P15/14

Abstract: 本发明提供一种奶牛溶菌酶基因（Lyz）乳腺特异性表达质粒及其构建方法和应用。具体地，PCR扩增Lyz基因的编码序列，将其插入到携带增强的绿色荧光蛋白基因的通用表达载体pEGFP-N1的多克隆位点中。通用表达载体pEGFP-N1经Ase I+Hind III双酶切，去除CMV启动子，克隆奶牛乳腺特异性表达β-乳球蛋白基因（BLG）启动子序列并取代Ase I和HindIII酶切位点，构建奶牛溶菌酶基因（Lyz）乳腺特异性表达质粒。采用上述重组质粒转染奶牛乳腺上皮细胞,得到的细胞系可用于分泌具有生物活性的奶牛溶菌酶，用于奶牛乳腺组织免疫机制研究；该重组质粒还可应用于基因治疗奶牛乳房炎制剂的研发。

公开(公告)号：CN114891122A

公开(公告)日：2022-08-12

申请号：CN202210640831.X

申请日：2022-06-08

Applicant: 扬州大学

Inventor： 杨章平 ,  张志鹏 ,  杨奕 ,  陈代杰 ,  陈志 ,  徐天乐

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  A61K38/17 ,  A61P15/14 ,  A61P31/04 ,  A61P37/08 ,  A23L3/3526 ,  A23B4/10 ,  A23B4/20

Abstract: 本发明属于生物工程领域，公开了一种奶牛乳腺上皮细胞生物反应器合成的奶牛抗菌多肽：包括奶牛气管抗菌肽、奶牛β‑乳球蛋白肽和EGFP绿色荧光标签融合蛋白，以原代奶牛乳腺上皮细胞作为生物反应器制备抗菌肽，可以显著提高所制备的抗菌肽活性；所述的奶牛气管抗菌肽可极显著降低金黄色葡萄球菌对细胞的损伤，细胞凋亡率下降81.9％，可有效治疗细菌诱导的小鼠乳腺炎；以所述抗菌多肽主要活性成分的保鲜剂，用于食品的保鲜，可以延长低温食品的保质期一倍以上；所述抗菌多肽含有特定的β‑乳球蛋白肽，其可诱导对乳蛋白的口服免疫耐受，能够减轻尤其是消除牛乳蛋白过敏症的急性症状。