-
公开(公告)号：CN104450761A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410769384.3
申请日：2014-12-12
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/66
Abstract: 本发明公开了一种双拷贝表达载体的构建方法，包括如下步骤：(1)PCR扩增目的基因：将带相同酶切位点的引物扩增目的基因；(2)单拷贝载体的构建：将PCR产物经电泳鉴定，回收后用EcoRI(A)酶切，纯化，然后用T4连接酶将载体和目的片段连接；(3)错位酶切：在目的基因内部寻找合适的酶切位点Ecla(B)及CofI(C)，然后用相应的酶进行酶切，通过电泳鉴定回收，分别得到酶切片段AC及BA’；(4)连接：将大片段B-A-A’-C与B-A’-A-C连接，转化大肠杆菌DH5α，得A-A’的双拷贝载体。本发明连接效率高,既避免了连接第二个拷贝时的空间位阻，又避免了连接时易出现的连接方向问题。
Search Results
1
records
(took 0.013 seconds)
筛选
AND
AND
过滤
NOT
NOT
Scan to Join
